JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 3:33 د • January 15th, 2026
ضع شريحة زجاجية مع عينة من الأنسجة الثابتة في مخزن مؤقت لاسترجاع المستضد وقم بتسخينها.
تكسر درجة الحرارة المرتفعة ودرجة الحموضة القلوية للمخزن المؤقت الروابط المتشابكة للبروتين الناجم عن التثبيت ، مما يؤدي إلى تعريض حواتم المستضد.
قم بتبريد الشريحة لمنع تلف الأنسجة الناجم عن الحرارة ، ثم اشطفها لإزالة المخزن المؤقت الزائد.
ضع حاجزا مسعورا وضع الشريحة في غرفة الرطوبة.
إضافة مخزن مؤقت لحظر النفاذية. يتخلل منظف المخزن المؤقت الأغشية الخلوية ، وتخفي البروتينات الحجب مواقع الربط غير المحددة لتقليل تلطيخ الخلفية.
قم بإزالة المخزن المؤقت الزائد ، وأضف كوكتيل الأجسام المضادة المترافقة بالمعدن ، واحتضنه للسماح بارتباط الأجسام المضادة بمستضدات معينة.
اغسل الشريحة وإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف بقعة نووية مترافقة بالمعدن تدخل الخلايا وترتبط بالحمض النووي.
اشطف البقعة الزائدة وجفف الشريحة.
باستخدام ماسح ضوئي ، احصل على صور عالية الدقة للسمات الهيكلية للأنسجة ، مما يساعد في تفسير البيانات من تحليل قياس الكتلة الخلوية للعينة الملطخة.
ابدأ بقسم من الأنسجة المعالجة مسبقا بحجم خمسة ميكرومتر مثبت فوق شريحة متوافقة مع التلوين المناعي. ضع الشرائح في مرسل شرائح.
لاسترجاع الحاتمة الناجمة عن الحرارة أو HIER ، أضف المخزن المؤقت HIER في مرسل التمرير المنزلق حتى يتم غمر الأنسجة تماما. ضع البريد المنزلق في غرفة إزالة الهوية ، وابدأ برنامج التسخين.
بعد انتهاء البرنامج ، ضع جهاز البريد المنزلق في صينية مملوءة بالماء البارد ، واتركه ليبرد. شطف الشرائح بالماء المقطر عدة مرات عن طريق زيادة الحجم تدريجيا.
قم بإزالة الشرائح من مرسل الشرائح ، وامسح المخزن المؤقت الزائد. لمنع فقدان الأجسام العازلة والأجسام المضادة المسدودة ، قم بتطويق الأنسجة باستخدام قلم حاجز كاره للماء.
احتضان الشرائح في غرفة رطوبة مخصصة لمدة ساعة واحدة. للحظر غير المحدد، أضف مخزن مؤقت للحجب إلى الشرائح في غرفة الرطوبة. بعد فترة الحضانة ، قم بإزالة المخزن المؤقت الزائد ، واترك العازلة المتبقية تجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة.
أضف محلول الجسم المضاد بحذر فوق الأنسجة واحتضانه طوال الليل في غرفة رطوبة عند أربع درجات مئوية.
بعد الحضانة ، اغسل الشريحة باستخدام PBS المحتوي على Triton لمدة 5 دقائق. أخيرا ، اشطف الشريحة مرتين باستخدام PBS لمدة 5 دقائق لكل منهما. الآن ، قم بمعالجة الأنسجة بصبغة intercalator واحتضانها في غرفة الرطوبة في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاثين دقيقة.
بعد الحضانة ، اغسل الشريحة بماء HPLC لمدة خمس دقائق ، وجففها في مجفف لمدة ثلاثين دقيقة.
بمجرد أن تجف الشريحة، قم بالمسح الضوئي باستخدام ماسح ضوئي مسطح للمستندات بدقة لا تقل عن 1200 نقطة في البوصة.
توضح هذه المقالة بروتوكولاً لاسترجاع المستضدات والصبغ المناعي لعينات الأنسجة المثبتة، مع التأكيد على أهمية التعامل السليم للحفاظ على سلامة الأنسجة وتعزيز رؤية المستضدات.
يُعد الكشف الدقيق عن المستضدات في الأنسجة المثبتة أمراً بالغ الأهمية للتحقق من الأهداف واكتشاف المؤشرات الحيوية في المراحل المبكرة من تطوير الأدوية. يتيح هذا البروتوكول سير عمل قابلاً للتكرار في الصبغ المناعي، مما يدعم التصوير عالي المحتوى والتحليلات اللاحقة في مسارات الاكتشاف. ومن خلال الحفاظ على سلامة الحاتمة وتقليل الضجيج الخلفي، فإنه يعزز جودة البيانات اللازمة لتقليل المخاطر الآلية وتقييمات الثقة في الأهداف.
تندرج هذه الطريقة ضمن تسلسل عملية الاكتشاف، بدءاً من اختبار فرضية الهدف وصولاً إلى تحديد المركبات الرائدة، مما يتيح كشفاً موثوقاً للمستضدات يساهم في تحديد الأولويات المبكرة.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026