إنشاء تكوين خلية كاملة من خلال طريقة Patch Clamp

ابدأ بشريحة دماغ فأر ثابتة موضوعة في غرفة تسجيل لإعداد الفيزيولوجيا الكهربية مملوءة بسائل دماغي نخاعي اصطناعي للحفاظ على بقاء الخلايا العصبية.

يحتوي الإعداد على ماصة دقيقة مجمعة مسبقا مملوءة بالمحلول الكاتيوني متصلة بمكبر للصوت ووحدة التحكم في الضغط.

تحت المجهر ، حدد موقع الخلية العصبية وضع الماصة الدقيقة بالقرب منها.

استخدم ضغط هواء إيجابي لإزالة أي حطام.

حرك الماصة الدقيقة باتجاه الخلية العصبية حتى تتشكل غمازة على الغشاء ، مما يشير إلى القرب العصبي.

استخدم شفطا ضعيفا لسحب رقعة غشائية صغيرة داخل الماصة الدقيقة.

يؤدي ذلك إلى إحكام إحكام يزيد من مقاومة الماصة الدقيقة ، مما يؤكد إحكام الغلق المستقر.

الحفاظ على إمكانات الخلية في إمكانية الراحة الفسيولوجية لاستقرار الخلية.

بعد ذلك ، قم بتطبيق شفط قصير وقوي لتعطيل غشاء التصحيح ، وإنشاء اتصال مباشر بداخل الخلية.

هذا التكوين للخلية بأكملها جاهز لتسجيل النشاط الكهربائي العصبي.

باستخدام عجلة التركيز البؤري الدقيقة للمجهر، ابدأ التركيز البؤري لأسفل مع خفض الماصة الدقيقة تدريجيا. قم دائما بالتركيز لأسفل أولا، ثم قم بخفض الماصة الدقيقة إلى مستوى التركيز البؤري للتأكد من أن طرف الماصة الدقيقة لا يخترق الشريحة فجأة. عندما تتلامس الماصة الدقيقة مع سطح الشريحة، قم بإبطاء سرعة المعالج الدقيق إلى الوضع المتوسط إلى المنخفض. اضغط برفق على الضغط الإيجا