JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:45 د • July 8th, 2025
خذ شريحة جذع دماغ الفأر التي تحتوي على النواة الدهليزية الإنسية ، أو MVN.
قم بتأمين الشريحة في غرفة تسجيل مملوءة بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي للحفاظ على صلاحية الخلايا العصبية.
تصور الشريحة تحت المجهر لتحديد موقع الخلايا العصبية MVN.
استخدم ضغطا إيجابيا لدفع ماصة دقيقة مملوءة بمحلول يحاكي البيئة داخل الخلايا عبر الأنسجة.
عندما تلامس الماصة خلية عصبية ، سوف يغمر الغشاء العصبي.
ضع ضغطا سلبيا لشفط جزء غشائي صغير ، مما يؤدي إلى إحكام إحكام
.بعد ذلك ، قم بتطبيق نبضات الضغط السلبي لتمزق الغشاء ، مما يؤدي إلى إنشاء اتصال مستمر بين الخلايا العصبية والماصة.
قم بتطبيق اتساع ضوضاء عشوائي على الخلايا العصبية وحدد سعة العتبة الفرعية التي تحفز الضوضاء بعدها إطلاق الخلايا العصبية.
أخيرا ، قم بتطبيق مجموعة من المحفزات الكهربائية على الخلايا العصبية جنبا إلى جنب مع سعة الضوضاء العشوائية للعتبة الفرعية.
قياس الكسب العصبي — قدرة الخلايا العصبية على تعديل استجابتها لإطلاق النار للمنبهات في وجود الضوضاء.
بالنسبة للفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح للخلية الكاملة ، أولا ، اسحب الماصات الدقيقة بمقاومة نهائية تتراوح من 3 إلى 5 ميغا أوم عند ملؤها بمحلول داخلي قائم على البوتاسيوم ، وضعها في الحمام. للحصول على تسجيلات مشبك التصحيح للخلية الكاملة من الخلايا العصبية الفردية في MVN ، انقل شريحة نسيج واحدة من غرفة الحضانة إلى غرفة التسجيل لإعداد الفيزيولوجيا الكهربية القياسية ، واستخدم خيطا من النايلون على وزن على شكل حرف U لتأمين الشريحة.
قم ببث غرفة التسجيل باستمرار باستخدام aCSF المكربن عند 25 درجة مئوية بمعدل تدفق يبلغ ثلاثة ملليلتر في الدقيقة ، واملأ ماصة دقيقة بمحلول داخلي. استخدم كمية صغيرة من الضغط الإيجابي باستخدام ماصة لدفع الحطام بعيدا عن طرف الماصة. باستخدام هدف طاقة أقل ، حدد موقع MVN قبل التبديل إلى طاقة عالية لتحديد موقع الخلايا العصبية الفردية داخل MVN.
قبل اختراق الأنسجة باستخدام الماصة، استخدم كمية صغيرة من الضغط الإيجابي لدفع الحطام بعيدا عن طرف الماصة، واستخدم المعالج الدقيق لتحريك الماصة نحو الخلية العصبية المحددة. يجب أن تتشكل غمازة صغيرة على الغشاء العصبي. حرر الضغط الإيجابي وقم بتطبيق كمية صغيرة من الضغط السلبي.
بمجرد تحقيق مانع تسرب بغيغاومتر واحد، قم بتطبيق ضغط سلبي لطيف وقصير وحاد على حامل الماصة من خلال منفذ الشفط لتمزيق الغشاء وإنشاء تكوين خلية كاملة. بعد ذلك ، احصل على تسجيلات المشبك الحالية للخلية الكاملة وفقا للبروتوكولات القياسية.
لتطبيق الضوضاء العشوائية والجيبية على الخلايا العصبية للنواة الدهليزية الإنسية الفردية ، اضبط نطاق السعات من 3 إلى 24 بيكوأمبير لتحديد عتبة الخلايا العصبية ومعدل إطلاق النار ، وقم بتجميع شدة التحفيز المنخفضة والعالية لتحديد العتبة الحسية.
بعد ذلك ، احسب متوسط معدل إطلاق النار خلال فترة 10 ثوان التي سيتم خلالها حقن الخطوة الحالية لإزالة الاستقطاب لكل مستوى حالي فردي. استخدم متوسط قيم معدل إطلاق النار لإنشاء معدل إطلاق مقابل المؤامرة الحالية. بعد ذلك ، قم بإجراء تحليل انحدار خطي لتحديد تدرج الخط الأنسب لتحديد الكسب العصبي.