إنشاء مشبك رقعة كامل الخلية للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي من شبكية العين المسطحة

ضع شبكية الفأر ذات التثبيت المسطح في محلول فسيولوجي داخل غرفة التسجيل.

باستخدام المجهر، ضع ماصة تسجيل فوق شبكية العين. تحتوي الماصة على قطب كهربائي ومملوءة بمحلول داخلي.

استخدم ضغطا إيجابيا لمنع انسداد الماصة، وأدخلها في شبكية العين، ثم قلل الضغط لتجنب تلف الأنسجة.

تقدم الماصة نحو خلايا النجوم ، أو SACs ، والتي ترتبط ارتباطا متشابك بالخلايا العصبية الأخرى.

اقترب من الخلية حتى تتشكل غمازة على غشاءها. حرر الضغط ، مما يسمح للغشاء بالالتصاق بالحافة.

استخدم تيارا سالبا لسحب رقعة غشائية في الماصة.

قم بتطبيق الشفط لتمزق الغشاء ، مما يؤدي إلى الاستمرارية بين القطب وسيتوبلازم الخلية ، وهي تقنية تسمى مشبك التصحيح للخلية بأكملها.

لتسجيل التيارات المشبكية ، قم بتطبيق جهد للحفاظ على ثبات إمكانات الغشاء ل SAC.

تؤدي الناقلات العصبية التي تطلقها الخلايا العصبية المرتبطة متشابك إلى تدفق الأيونات عبر مستقبلات SAC المشبكية ، والتي يقاسها القطب.

في هذا الإجراء ، قم بتصفية المحلول الداخلي من خلال مرشح حقنة في خيوط الردم المخصصة. بعد ذلك ، أدخل الفتيل في ماصة دقيقة مسحوبة حديثا ، وقم بتوزيع المحلول الداخلي بالقرب من الطرف حتى يغطي المحلول سلك القطب الفضي لأكثر من 5 ملليمترات. بعد ذلك ، اربط الماصة الدقيقة على حامل قطب كهربائي بعمود شفط ، والذي يمكن من خلاله ضبط الضغط داخل القطب عن طريق دفع أو سحب مكبس ح