موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:29 دقيقة • July 8th, 2025
خذ غطاء يحتوي على ثقافة عصبية منقوشة 1D.
يتمتحميل الخلايا العصبية بصبغة مؤشر الكالسيوم ، والتي تتألق عند ربط الكالسيوم.
انقل الغطاء إلى غرفة تصوير المجهر الفلوري التي تحتوي على محلول تسجيل خارج الخلية.
قم بتجميع حامل بقطبين سلكين متوازيين مفصولين بمسافة.
اقلب الحامل وضعه فوق الثقافة العصبية باستخدام الأقطاب الكهربائية المغمورة في محلول التسجيل.
قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية بمكبر للصوت. قم بتطبيق موجة مربعة ثنائية القطب نابضة غير DC لتوليد مجال كهربائي أحادي الاتجاه موحد عبر الخلايا العصبية دون التسبب في إصابة.
يثير المجال الكهربائي المتولد الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى جهد فعل.
ينتقل جهد الفعل على طول المحور العصبي ، مما ينشط قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ويسبب تدفق الكالسيوم إلى محطة الخلايا العصبية. علاوة على ذلك ، يتم إطلاق الناقلات العصبية في المشبك ، مما يسهل الإرسال المتشابك.
بعد تدفق أيونات الكالسيوم ، ترتبط هذه الأيونات بالصبغة داخل الخلايا والفلور ، مما يشير إلى نشاط الخلايا العصبية استجابة للتحفيز الكهربائي.
قبل التحفيز الكهربائي ، ضع غطاء الجلوس في غرفة التصوير. لتحفيز الخلايا بمجال كهربائي ذو اتجاه ثابت ، استخدم قطبين متوازيين مفصولين ب 11 ملم ويحددان على جانبي المزرعة المطلية على أغطية 13 ملم. بعد ذلك ، قم بتجميع غرفة تصوير الثقافة وحامل القطب المطابق بحيث يتم غمر الأقطاب الكهربائية السلكية في الوسائط خارج الخلية ووضعها ملليمتر واحد فوق الثقافة.
بعد ذلك ، قم بتوصيل زوج القطب الكهربائي الفردي بمكبر الصوت التشغيلي الذي يضخم الإشارة من المولد. قم بتطبيق نبضة واحدة من الموجة المربعة ثنائية القطب بدورة عمل 50٪ وسعة 22 فولت. استخدم موجة ثنائية القطب بدون مكون تيار مستمر لتجنب التحليل الكهربائي الذي قد يحدث في الأقطاب الكهربائية. ضع النبضة التي تدوم من 10 ميكروثانية إلى أربعة مللي ثانية لضمان التحفيز الفعال ، ولكن منع إصابة الخلايا.