موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:01 دقيقة • July 8th, 2025
خذ الديدان المعدلة وراثيا Caenorhabditis elegans التي تنمو على كتلة أجار.
تعبر هذه الديدان عن مؤشر الكالسيوم ، GCaMP5 ، وبروتين فلورسنت غير حساس للكالسيوم ، mCherry ، في الخلايا العصبية التي تنظم سلوك وضع البيض.
قم بتركيب الديدان على مرحلة المجهر المقلوب.
تصور مضان GCaMP5 و mCheric.
قبل إطلاق البويضات ، يتم تنشيط الخلايا العصبية ، وفتح قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يسمح بتدفق الكالسيوم.
يرتبط الكالسيوم داخل الخلايا ب GCaMP5 ، مما يغير شكله ويزيد من التألق.
وفي الوقت نفسه ، يظل مضان mCherry دون تغيير ، مما يتيح تتبع الخلايا العصبية.
تطلق الخلايا العصبية المنشطة ناقلات عصبية ترتبط بمستقبلات عضلية معينة ، مما يؤدي إلى إطلاق البويضات.
بعد الإطلاق ، تغلق قنوات الكالسيوم ، مما يقلل من تدفق الكالسيوم ومضان GCaMP5.
بعد ذلك ، التقط صورا ساطعة لمراقبة حركة الدودة.
يحدث انخفاض الحركة بسبب تقلصات العضلات قبل إطلاق البويضات.
بعد إطلاق البويضة ، تسترخي العضلات ، وتستعيد الحركة الطبيعية.
قم بقياس نسبة تألق GCaMP5-mCherry وسرعة الدودة للكشف عن أحداث إطلاق البيض.
بالنسبة لتصوير الكالسيوم النسبي، ضمن علامة التبويب تسلسل، انقر فوق ابدأ لبدء التسجيل، وتتبع الدودة باستخدام عصا التحكم، مع الحفاظ على الخلايا والمشابك ذات الأهمية في مركز مجال الرؤية. في اللحظة التي يبدأ فيها التسجيل الفلوري ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية