موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:06 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة إكليلية من الفأر في غرفة تسجيل مليئة ب aCSF.
تحتوي الشريحة على مجموعة عصبية هرمية متفرقة تعبر عن إنزيم مستهدف وبروتين فلوري.
قم بتجميع ماصة تسجيل تشتمل على محلول داخل الخلايا وقطب كهربائي متصل بمكبر صوت لقياس الإشارات العصبية.
تحديد منطقة الأنسجة المستهدفة مجهريا وتحديد موقع الخلايا العصبية الفلورية.
اضغط إيجابيا على الماصة لمنع الانسداد ودفعها إلى الخلية العصبية المستهدفة.
يتسبب الضغط الإيجابي في حدوث فجوة طفيفة على الغشاء العصبي عند ملامسته.
حرر الضغط ، وتشكيل ختم محكم بين الغشاء والطرف.
اضبط إمكانات الاحتفاظ بقيمة سالبة ثابتة لتثبيت الخلايا العصبية.
استخدم ضغطا سلبيا قصيرا لتمزق الغشاء ، وتوصيل السيتوبلازم بداخل الماصة وإنشاء تكوين خلية كاملة.
قم بالتبديل إلى وضع المشبك الحالي وقم بتطبيق نبضات التيار الإيجابي ، مما يولد إمكانات عمل تدل على استثارة الخلايا العصبية.
انقل شريحة إلى غرفة التسجيل باستخدام ماصة باستور أو فرشاة صغيرة. أمسك الشريحة باستمرار بالقيثارة ، وقم بتكليفها باستخدام ACSF بمعدل 2 مل في الدقيقة. لتصحيح خلية عصبية إيجابية GFP ، حدد موقع منطقة الاهتمام من خلال المجهر عند 10x. بعد ذلك ، ابحث عن خلية إيجابية GFP باستخدام هدف 60x.
بعد ذلك ، املأ قطب التسجيل بمحلول داخل الخلايا. بعد ذلك، ضع ماصة زجاجية في حامل الماصة. بعد ذلك ، ضع طرف الماصة في الحمام وركز على الحافة. بمجرد أن تكون الماصة في الحمام، قم بالضغط الإيجابي من خلال نظام التحكم في الضغط الخلفي.
اقترب من الخلية ذات الأهمية تحت التوجيه البصري مع الحفاظ على الضغط الخلفي في الماصة. عند ظهور غمازة صغيرة على سطح الخلية ، حرر الضغط. في هذه المرحلة ، قد يتم تشكيل ختم محكم بمقاومة أكبر من 1 جيجا أوم. خلاف ذلك ، قم بتطبيق ضغط سلبي خفيف لتسهيل ذلك.
أثناء تشكيل الختم ، اجعل مشبك الجهد الثابت إلى سالب 60 مللي فولت. بمجرد تشكيل ختم الجيجاأوم ، قم بتطبيق نبضة شفط لتمزيق غشاء الخلية واقتحام وضع الخلية بأكملها. بمجرد أن يكون في وضع الخلية الكاملة ، قم بالتبديل من مشبك الجهد إلى وضع المشبك الحالي وابدأ التسجيل.