JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 4:01 د • July 8th, 2025
قم بتأمين خنزير صغير حديث الولادة مخدر في إطار تجسيمي.
قم بعمل شق خط الوسط للكشف عن الجمجمة.
قم بإزالة جزء من الجمجمة ، ثم قم بإزالة الجافية للوصول إلى الدماغ.
قم بإصلاح مصفوفة أقطاب كهربائية دقيقة، أو MEA في الإطار التجسيمي.
يتكون MEA من عمود صلب ومواقع تسجيل ، بما في ذلك المواقع الحساسة للغلوتامات المغلفة بأوكسيديز الغلوتامات ومواقع الخافرة المغلفة بمصفوفة بروتين غير نشطة.
ضع MEA عموديا فوق موقع الجراحة وضع قطبا كهربائيا مرجعيا زائفا أسفل فروة الرأس للحصول على مرجع ثابت للجهد الأساسي.
أدخل MEA في منطقة الدماغ التي تهمك وابدأ القياس.
يحول أوكسيديز الغلوتامات في مواقع التسجيل غلوتامات الدماغ خارج الخلية إلى بيروكسيد الهيدروجين ، الذي يخضع للأكسدة الكهروكيميائية على سطح القطب ، مما يولد تيارا.
تقيس المواقع الخافرة ضوضاء الخلفية.
تطبيع إشارات الموقع الحساسة للغلوتامات إلى إشارات موقع الخافر لقياس مستويات الغلوتامات في الدماغ تحت التخدير.
للبدء ، قم بإنشاء شق خط الوسط من 4 إلى 6 سم على طول الجمجمة مع توخي الحذر لتجنب تسجيل الجمجمة بالمشرط. بمجرد إجراء الشق ، استخدم التراجع اللطيف والتشريح الحاد لرفع فروة الرأس من الجمجمة.
بعد ذلك ، افرك الجمجمة برفق باستخدام وسادة شاش لإزالة أي نسيج ضام وفضح خطوط الخياطة. بعد ذلك ، حدد الموقع المقصود لبضع القحف. إذا ظل مجال الاهتمام محجوبا ، فقم بعكس فروة الرأس.
الآن ، استخدم مثقابا جراحيا لإنشاء نافذة حج القحف تبلغ مساحتها حوالي 0.25 سم مربع تغطي الهيكل محل الاهتمام. احرص على عدم إصابة الجافية أو الدماغ الأساسي. حسب الحاجة ، استخدم الأدوات الجراحية الدقيقة لاستئصال الجافية التي تغطي أنسجة المخ. توخي الحذر الشديد لتجنب إتلاف الدماغ.
تستخدم هذه التجربة مصفوفة أقطاب كهربائية دقيقة قائمة على الإنزيم موصوفة سابقا ومغلفة مسبقا بأوكسيديز الغلوتامات ومطلية بالكهرباء ب MPD. تحتوي مصفوفات الأقطاب الكهربائية الدقيقة على عمود صلب مقاس 40 ملم مخصص للاستخدام مع الخنازير. قم بتأمين الذراع المعدني في المعالج الدقيق ، ثم ضع مجموعة الأقطاب الكهربائية الدقيقة عموديا قدر الإمكان فوق بريجما.
بعد ذلك ، قم بخفض المصفوفة بعناية إلى أدنى مستوى ممكن دون لمس سطح الجمجمة ، مع ملاحظة إحداثيات البرجما. الآن ، استخدم أطلس دماغ الخنزير الصغير لتحديد الإحداثيات التجسيمية الدقيقة للبنية محل الاهتمام. ثم قم بإعادة وضع القطب الصغير وفقا لذلك.
بعد ذلك ، ضع القطب المرجعي الزائف تحت فروة الرأس ، مع ضمان ملامسة. الآن ، قم بخفض مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة ببطء في الدماغ إلى العمق المناسب تقريبا. بالنسبة لآخر 2 ملم من السفر ، استخدم محرك هيدروليكي صغير لخفض المصفوفة برفق إلى الهيكل ذي الأهمية مع الحد الأدنى من صدمة الأنسجة.
بعد وضع مصفوفة الأقطاب الكهربية الدقيقة ، انتظر 30 دقيقة للسماح للأقطاب الكهربائية بالوصول إلى خط الأساس. ثم خذ القياسات لمدة ثلاث ساعات تقريبا. إذا كان الخنزير الصغير سينجو من التجربة ، فأغلق الشق بعد جمع البيانات.