تسجيل النشاط العصبي لأنسجة الحصين غير المطوية باستخدام مصفوفة الأقطاب الكهربية الدقيقة المخترقة

خذ غرفة تسجيل تحتوي على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة أو PMEA، والتي تسجل الإشارات الكهربائية من الأنسجة العصبية.

قم بتوصيل المدخل بالزجاجات التي تحتوي على aCSF المؤكسج و aCSF المؤكسج باستخدام 4-aminopyridine أو 4-AP باستخدام موصل ثلاثي الصمامات.

قم بتوصيل المخرج بأنبوب مفرغ.

قم بتسخين خط الأنابيب بين المدخل وثلاثي الصمامات إلى درجة الحرارة الفسيولوجية.

مع إغلاق المدخل والمخرج ، انقل الحصين المكشوف إلى الغرفة.

تحت المجهر ، ضع الحصين على PMEA.

قم بإزالة المحلول من الغرفة.

ضع مرساة أنسجة لتثبيت الأنسجة على أقطاب PMEA.

افتح المدخل والمخرج لبدء تدفق aCSF.

احتضان الأنسجة باستخدام aCSF للسماح بالتأقلم العصبي.

ثم قم بالتدفق في aCSF باستخدام 4-AP. يمنع 4-AP قنوات البوتاسيوم العصبية ، مما يطيل مدة جهد الفعل.

يلتقط PMEA الإشارات الكهربائية التي تتناسب مع إطلاق النار العصبي المعزز من الخلايا العصبية في الحصين.

في هذا الإجراء، املأ زجاجة واحدة ب aCSF العادي وزجاجة أخرى ب 4-AP aCSF. قم بتعبئة المحاليل بنسبة 95٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون من بداية التجارب. استخدم موصل ثلاثي الصمامات للتحكم في الحل الذي سيتم تحديده أثناء التجربة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل أنبوب مفرغ بمخرج الغرفة لإزالة المحلول في حاوية الغبار. قم بتسخين خط الأنابيب قبل توصيل المحلول إلى غرفة التسجيل واحتفظ به عند درجة حرارة يتم التحكم فيها بزاوية 35 درجة مئوية. بعد إغلاق مدخل ومخرج غرفة التسجيل ، استخدم قطارة ماصة زجاجية مصنوعة خصيصا لنقل الحصين غير المطوي إلى غرفة التسجيل.

تحت المجهر ، ضع الحصين غير المطوي بحيث يكون جانبه الواضح متجها لأسفل ، ومنطقة CA3 تشير بعيدا ، ومجال CA1 يشير إلى الباحث. قم بشفط المحلول في الغرفة بعناية باستخدام ماصة مفرغة من حافة غرفة التسجيل حتى تجف الغرفة وتقع الأنسجة على المصفوفة.

بعد ذلك ، ضع بعناية مرساة أنسجة مخصصة أعلى الأنسجة لتثبيت الحصين غير المطوي على المصفوفة. أعد ملء غرفة التسجيل ببضع قطرات من المحلول. افتح المدخل والمخرج تدريجيا لضبط معدل التدفق إلى حوالي قطرتين في الثانية في غرفة التنقيط الوريدي.

احتضان الأنسجة في غرفة التسجيل باستخدام aCSF العادي لمدة دقيقة واحدة تقريبا. بعد ذلك، قم بتبديل مصدر المحلول إلى 4-AP aCSF المذاب ، واضبط معدل التدفق بشكل صحيح. احتضان الأنسجة في 4-AP المذاب aCSF لمدة 5 إلى 10 دقائق قبل التسجيل.