تسجيل النشاط العصبي لأنسجة الحصين غير المطوية باستخدام مصفوفة الأقطاب الكهربية الدقيقة المخترقة

خذ غرفة تسجيل تحتوي على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة أو PMEA، والتي تسجل الإشارات الكهربائية من الأنسجة العصبية.

قم بتوصيل المدخل بالزجاجات التي تحتوي على aCSF المؤكسج و aCSF المؤكسج باستخدام 4-aminopyridine أو 4-AP باستخدام موصل ثلاثي الصمامات.

قم بتوصيل المخرج بأنبوب مفرغ.

قم بتسخين خط الأنابيب بين المدخل وثلاثي الصمامات إلى درجة الحرارة الفسيولوجية.

مع إغلاق المدخل والمخرج ، انقل الحصين المكشوف إلى الغرفة.

تحت المجهر ، ضع الحصين على PMEA.

قم بإزالة المحلول من الغرفة.

ضع مرساة أنسجة لتثبيت الأنسجة على أقطاب PMEA.

افتح المدخل والمخرج لبدء تدفق aCSF.

احتضان الأنسجة باستخدام aCSF للسماح بالتأقلم العصبي.

ثم قم بالتدفق في aCSF باستخدام 4-AP. يمنع 4-AP قنوات البوتاسيوم العصبية ، مما يطيل مدة جهد الفعل.

يلتقط PMEA الإشارات الكهربائية التي تتناسب مع إطلاق النار العصبي المعزز من الخلايا العصبية في الحصين.

في هذا الإجراء، املأ زجاجة واحدة ب aCSF العادي وزجاجة أخرى ب 4-AP aCSF. قم بتعبئة المحاليل بنسبة 95٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون من بداية التجارب. استخدم موصل ثلاثي الصمامات للتحكم في الحل الذي سيتم تحديده أثناء التجربة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل أنبوب مفرغ بمخرج الغرفة لإزالة المحلول في حاوية الغبار. قم بتسخين خط الأنابيب قبل توصيل المحلول إلى غرفة التسجيل واحتفظ به عند درجة