الشريان المساريقي تقلص والاسترخاء عن طريق الدراسات الآلي Myography أسلاك

يستخدم هذا الإجراء الفئران الحساسة لملح الدمية والمقاومة للملح لمقارنة تفاعل شرايين مقاومة المساريقية تحت توتر الفينيليفرين والكالسيوم خارج الخلية. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الممرات المساريقية أولا عن وتشريح فروع الشريان المقاومة. مقبل. يتم ربط أول سلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ من خلال جزء قصير من الشريان المقطوع ويتم تثبيت الوعاء في غرفة الرسم البياني.

ثم يتم ربط سلك الفولاذ المقاوم للصدأ الثاني من خلال تجويف الوعاء بالتوازي مع السلك الأول. بعد ذلك ، يتم تمديد الوعاء المركب إلى محيط داخلي طبيعي. تتمثل الخطوة الأخيرة من الإجراء في إعادة تنشيط الوعاء عن طريق تحديه بالتطبيقات المتكررة للفينيليفرين وإرخاءه بالتطبيقات التراكمية للكالسيوم.

في النهاية ، تظهر النتائج تغيرات في التوتر في الوعاء ، والتي يمكن تحويلها إلى منحنى استجابة الكالسيوم واستخدامها لتحديد قيم EC 50. للمقارنة. خطرت لنا فكرة استخدام هذه الطريقة لأول مرة عندما اكتشفنا أن شبكة nev لبطاريات الفئران الحجرية عبرت عن مستقبلات استشعار الكالسيوم النحاسية gpro.

يمكن دراسة ذلك بنفس طريقة دراسة مستقبلات AIC المريرة ، والتي يتم تنشيطها بواسطة ناهض. بشكل عام ، قد يكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن طبقات البطانة والعضلات الملساء صغيرة. تتلف الأوعية بسهولة.

إذا حدث هذا ، فقد تتعرض الخواص الميكانيكية لهذه الأوعية للخطر. للبدء ، قم بإعداد منطقة العمل والأدوات الجراحية. ضع مخدرا على ظهره وامسح البطن بالكحول.

بعد إجراء شق البطن في خط الوسط، استخدم المقص لإزالة حوالي 85 سم من الأمعاء، بما في ذلك الشريان المساريقي العلوي. اقطع الطرف القريب بالقرب من البواب والطرف البعيد بالقرب من التقاطع اللفائفي. ضع القسم المقطوع في طبق بتري مغطى يحتوي على محلول ملح فسيولوجي أو PSS في درجة حرارة الغرفة.

قم بتثبيت الطرف القريب من الأمعاء إلى اليمين ثم قم بتثبيت ما تبقى من الأمعاء في عكس اتجاه عقارب الساعة. بعد ذلك ، قم بتشريح جزء من الشريان المساريقي يحتوي على الفرعين الثاني والثالث وقطعة من الأمعاء من الطرف القريب. تحديد نقطة فرع الشريان المساريقي على شكل حرف V وتشريحها بعيدا عن الوريد.

استخدم الملقط لسحب الأنسجة الدهنية والضامة برفق لتجنب ملامسة الشريان مباشرة. لبدء تركيب السفينة ، قم بقطع جزأين من الشريان بطول ملليمترين تقريبا. يمكن استخدام طرف سلك الفولاذ المقاوم للصدأ الخالي من التنغستن بطول أربعة سنتيمترات 40 ميكرومتر لفتح تجويف الشريان.

ثم استخدم ملقطا دقيقا لإدخال السلك في تجويف كل شريان. مع الحرص على عدم إتلاف البطانة ، املأ غرفة الكسب غير المشروع myo ب PSS عند 37 درجة مئوية. استخدم الملقط لنقل جزء الوعاء الملولب إلى الغرفة.

بعد ذلك ، انقل الجزء القريب من الوعاء إلى غرفة الرسم البياني العضلي واسحب الطرف على طول السلك لإدخاله في الوعاء. تجنب شد الوعاء. قم بتأمين الطرف القريب من السلك عكس اتجاه عقارب الساعة أسفل برغي التثبيت القريب على الفك الأيمن المتصل بالميكرومتر.

أمسك الطرف الحر للسلك بالملقط وقم بتثبيته في اتجاه عقارب الساعة أسفل برغي التثبيت البعيد على الفك الأيمن ، وتأكد من أن جزء الوعاء على طول السلك يقع في الفجوة بين الفكين دون إجراء أي اتصال بالفك نفسه. اربط الفكين عن بعضهما البعض. قم بمحاذاة السلك الثاني بالتوازي مع الوعاء وأدخله في الطرف البعيد من التجويف.

قم بتغذية السلك برفق من خلال تجويف جزء الوعاء بحركة واحدة باستخدام السلك المركب بالفعل كدليل. أمسك السلك على بعد حوالي سنتيمتر واحد من الوعاء لتجنب تمديده أثناء المناورة وتجنب لمس البطانة. قم بربط الفكين معا وتأكد من أن سلك التثبيت الثاني يتحرك أسفل سلك التثبيت الأول المثبت على اليد اليمنى.

بتأمين الفك الطرف القريب من السلك الثاني في اتجاه عقارب الساعة أسفل برغي التثبيت القريب للفك الأيسر المتصل ب transge. قم بتأمين الطرف البعيد من السلك أسفل برغي التثبيت على الفك الأيسر وشدها لتمديد السلك. بمجرد اكتمال التركيب ، اترك 30 دقيقة للتوازن عند 37 درجة مئوية.

بعد التوازن ، يتم إعادة ضبط المحرك من قائمة التثبيت ويبدأ إجراء التطبيع ، الذي يمتد الوعاء إلى محيط داخلي طبيعي. للبدء ، افتح قائمة التطبيع واضبط الضغط الانتقالي المستهدف على 13.3 كيلو باسكال. بعد ذلك ، قم بتعيين مدة كل خطوة من خطوات التسوية إلى 60 ثانية.

وينبغي أن تساوي نسبة IC واحد إلى IC 100 0,9 وينبغي ضبط معايرة IP على دلتا نجمتين. قم بقياس طول الشريان المساريقي المركب باستخدام قراءات العدسة المجهرية عندما تكون خطوط الشعر فوق الجزء البعيد والخلايا العصبية في الجزء الوعائي بعد التطبيع ، يتم إعادة تنشيط الأوعية عن طريق إجراء بداية قياسية تتكون من سلسلة من المحفزات وفترات الغسل.

أولا ، استبدل غطاء غرفة myo وابدأ التهوية بنسبة 95٪ هواء و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. املأ الغرفة ب PSS الطازج الذي يحتوي على 100 ميكرومولار من حمض الأسكوربيك. قم بعقد الوعاء بخمسة شمر ميكرومولار أو رين أو PE لمدة خمس دقائق واغسله أربع مرات باستخدام PSS المؤقت بعد الغسيل الأخير ، أعد ملء الغرفة ب PSS وانتظر ثلاث دقائق قبل إعادة ملء الغرفة ب PSS والتعاقد مع PE.As الموضحة سابقا ، أصبح الشريان جاهزا الآن للتجربة.

قم بقياس استرخاء الأوعية المتعاقدة عن طريق إضافة تركيزات متزايدة من كلوريد الكالسيوم بشكل تراكمي. يوضح هذا الجدول أن التوترات القاعدية بعد تطبيق الفينيليفرين تختلف بين الجرذان الحساسة لمحلول الدمية أو الحساسية لمحلول الدمية والجرذان المقاومة للملح DR. يظهر هذا الأثر من فأر الويستار استرخاء الشرايين المتقلصة بالبولي إيثيلين عن طريق الإضافات التراكمية لاسترخاء الكالسيوم مع ضعف شديد في أنسجة فئران DS مقارنة بفئران ويستار ومقارنة ب Dr.Rats كما هو موضح هنا ، يمكن رؤية الاختلافات في حساسية الكالسيوم في منحنيات استجابة الكالسيوم ومرة أخرى عند حساب قيم EC 50.

أخيرا ، تظهر فئران DS انخفاضا في التعبير عن مستقبلات استشعار الكالسيوم في الشرايين مقارنة ب Dr.Rats بمجرد إتقانها. يمكن القيام بهذه التقنية في غضون ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية مقارنة تفاعل الأوعية الدموية للمركب المعوي الصغير والمركب الخارجي في ظل ظروف متساوية القياس.