نهج غير جراحي لدراسة الفيزيولوجيا الكهربية للخلايا العصبية الحركية في أجنة أسماك الزرد

ضع أجنة الزرد المعدلة وراثيا تحت مجهر مجسم ولاحظ الالتفاف التلقائي للذيل الذي تسببه الخلايا العصبية الحركية للحبل الشوكي.

تتسبب الخصائص الجوهرية لهذه الخلايا العصبية في تدفق الأيونات عبر قنوات الصوديوم ، مما يؤدي إلى إزالة الاستقطاب الغشائي التلقائي وتوليد إمكانات الفعل التي تنتشر إلى العضلات ، مما يؤدي إلى لف الذيل. قياس تردد اللف.

نقل بعض الأجنة إلى حاصرات قناة الصوديوم لمنع تدفق الصوديوم وتقييم تردد اللف المنخفض.

قم بتركيب الأجنة غير المعالجة في الاغاروز المنصهر ؛ دع الاغاروز يتجمد لتقييد الحركة ، وراقب تحت المجهر الفلوري.

تعبر الخلايا العصبية الحركية عن مستشعر حيوي مع مجال استشعار الجهد المرتبط بالغشاء ، أو VSD ، مدمج مع الفلوروفورات المانحة والمتقبلة.

يغير إزالة الاستقطاب شكل VSD ، مما يجعل الفلوروفورات أقرب

عند الإثارة ، ينقل المتبرع الطاقة إلى المستقبل ، مما يتسبب في انبعاث مضان المستقبل.

أضف الحاجز لتثبيط إزالة الاستقطاب ، مما يقلل من انبعاث المستقبل ، مما يؤكد تثبيط إزالة الاستقطاب التلقائي في الخلايا العصبية.

لتحليل لف الذيل التلقائي ، انقل الأجنة إلى طبق بتري دائري مقاس 90 ملم مملوء بماء السمك يحتوي على 0.2٪ DMSO ، وقم بفك الكشط يدويا باستخدام ملقطين من صائغ بأطراف أو إبر حادة. بعد ذلك ، احتضن الأجنة لمدة 5 دقائق عند 28 درجة مئوية. باستخدام كاميرا رقمية مثبتة على مجهر مج