JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 4:00 د • July 8th, 2025
قم بتركيب ذبابة الفاكهة على حامل ورأسه مكشوف.
اصنع فتحة في عين واحدة وقم بإزالة القرنية لكشف شبكية العين.
ضع الحامل على منصة التسجيل.
أدخل قطبا مرجعيا غير حاد يحتوي على محلول ملحي فسيولوجي في كبسولة الرأس.
بعد ذلك ، أدخل قطب تسجيل حاد يحتوي على محلول يحاكي البيئة داخل الخلايا من خلال الفتحة في شبكية العين.
اسمح للعين بالتكيف مع الظلام.
قم بقياس مقاومة قطب التسجيل للتأكد من ملاءمته للتسجيل.
بعد ذلك ، تخلص من فرق الجهد الأساسي بين أقطاب التسجيل والمرجعية.
أثناء التكيف المظلم ، تظل القنوات الأيونية المحددة في خلايا المستقبلات الضوئية للشبكية مفتوحة ، مما يسمح بتدفق أيونات إيجابي ثابت.
تحفيز العين بومضات ضوئية.
ردا على ذلك ، تغلق القنوات الأيونية ، مما يقلل من تدفق الأيونات الإيجابي ويعزز التدفق.
وبالتالي ، تصبح إمكانات الغشاء للمستقبلات الضوئية أكثر سلبية ، ويتم قياسها بواسطة قطب التسجيل كانخفاض في الجهد.
عند تشغيل مضخم القطب الصغير ، قم دائما بتأريض عن طريق لمس السطح المعدني لقفص فاراداي أو الطاولة المضادة للاهتزاز لمنع الشحنات الساكنة. قم بتأمين الذبابة المثبتة على عمود منصة إعداد الذبابة.
قم بتدوير حامل الذبابة بحيث تكون العين اليسرى للذبابة تواجه المحقق مباشرة. بعد ذلك ، استخدم مناور دقيق صغير خشن لإدخال القطب المرجعي الحاد برفق من خلال أوسيلي الذبابة في كبسولة الرأس. تأكد من أن الذبابة لا تزال تبدو بصحة جيدة وتحرك قرون الاستشعار الخاصة بها. يجب أن يكون التحضير رائعا ليستحق التسجيل من.
الآن ، قم بدفع القطب الصغير الحاد للتسجيل في العين اليسرى من خلال الفتحة المطلية بالهلام. عند دخوله الأنسجة ، يجب أن يكون موقع طرف القطب واضحا من خلال نمط الانعكاس. يجب توجيه طرف القطب الهش بشكل مثالي وإلا سينكسر ، وهو أمر صعب للغاية.
اعتمادا على نوع الخلية التي يتم تسجيلها منها ، يجب أن يكون رأس الذبابة متجها بشكل مختلف قليلا. مع وضع الأقطاب الكهربائية في مكانها ، قم بتشغيل مضخم القطب الكهربائي الصغير. ثم قم بإيقاف تشغيل مصدر الضوء البارد ، وافصله عن التيار الكهربائي ، وقم بتوصيله بالأرض المركزية لتقليل الضوضاء الكهربائية التي تسببها الحلقة الأرضية.
بعد ذلك ، اضبط أدلة الضوء ذات الرأس المنحنية بحيث يمكن تحريك نظام ذراع الكاردان بحرية حول الذبابة. بعد ذلك ، قم بإطفاء أضواء الغرفة لوضع تحضير الذبابة في ظلام نسبي. الآن ، قم بقياس مقاومة قطب التسجيل في العين. يجب أن يتراوح بين 100 و 250 ميغا أوم.
بعد ذلك ، اضبط مكبر الصوت على المشبك أو الجسر الحالي ، وقم بصفر الجهد بين الأقطاب الكهربائية. بعد أن تتكيف الذبابة مع الظلام لبضع دقائق ، قم بدفع طرف قطب التسجيل في العين بخطوات من 0.1 إلى 1 ميكرون باستخدام متدرج بيزو أو باستخدام دوران لطيف لمقبض الدقة الدقيقة.
في كل خطوة ، حفز العين بومضة ضوئية من 1 إلى 10 مللي ثانية. سيؤدي كل وميض ضوئي إلى انخفاض قصير في الجهد أو ERG.