JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 4:06 د • July 8th, 2025
ابدأ بيرقة الزرد المشلولة والمعطلة في غرفة تسجيل مملوءة بمحلول خارج الخلية في إعداد الفيزيولوجيا الكهربية.
املأ ماصة دقيقة واردة بالمحلول خارج الخلية الذي يحتوي على أيونات توفر الموصلية الكهربائية لتسجيل النشاط العصبي.
قم بتجميعه في مناور دقيق يحتوي على قطب تسجيل متصل بمكبر للصوت لتسجيل الإشارة.
استخدم ضغط هواء إيجابي لمنع انسداد الماصة.
حرك طرف الماصة على طول عصب الخط الجانبي وضعه بجوار العقدة الواردة التي تحتوي على مجموعة من أجسام الخلايا العصبية الواردة.
ترتبط العمليات الخلوية لهذه الخلايا العصبية بخلايا الشعر الموجودة على طول الخط الجانبي ، والتي تستشعر حركات الماء.
ثم استخدم ضغطا سلبيا لطيفا لتشكيل ختم فضفاض بين الماصة الدقيقة والعقدة الواردة.
سجل الإشارات الكهربائية من الخلايا العصبية الواردة ، والتي تتلقى المدخلات الحسية من خلايا الشعر في اليرقة المجمدة.
قم بتثبيت يرقات الزرد ونقلها إلى طبق بتري مقاس 35 ملم باستخدام ماصة نقل ذات رأس كبير. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من المحلول المحيط. اغمر اليرقات في 10 ميكرولتر من 0.1٪ ألفا بونجاروتوكسين لمدة خمس دقائق تقريبا. اغسل اليرقة المشلولة بمحلول خارج الخلية لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، استخدم ماصة نقل لنقل اليرقة من حمام المحلول خارج الخلية إلى طبق التسجيل ذو القاع السيليكون.
تحت المجهر المجسم ، ضع اليرقات برفق باستخدام ملقط رفيع فوق مركز حصيرة السيليكون ، والجانب الجانبي لأعلى مع نهايات الجسم الأمامية والخلفية من اليسار إلى اليمين. باستخدام ملقط رفيع الرؤوس ، أدخل الدبوس المحفور بشكل متعامد في السيليكون من خلال الحبل الظهري لليرقات ، مباشرة الظهرية إلى فتحة الشرج. أدخل الدبوس الثاني من خلال الحبل الظهري بالقرب من نهاية الذيل ، وأدخل الدبوس الثالث من خلال ظهرية الحبل الظهري للمثانة الغازية. أدخل الدبوس الرابع من خلال الحويصلة الأذنية مع توفير دوران طفيف أثناء إدخال الدبوس في الغلاف.
عند تطبيق دوران طفيف ، راقب الأنسجة بين الكليثروم وحويصلة الأذن للكشف عن مجموعة سوماتا واردة. ضع الحمم البركانية المثبتة تحت هدف 10 مرات على مرحلة ثابتة من مجهر DIC ، وقم بتوجيه الشقوق الحاجزية العضلية للكتل العضلية بالتوازي مع متجه مرحلة الرأس الأيسر.
ضع السلك الأرضي في محلول الحمام ، وتأكد من توصيله بمرحلة الرأس اليسرى. املأ قطب التسجيل الوارد ب 30 ميكرولترا من المحلول خارج الخلية، وأدخله في حامل ماصة مرحلة الرأس الأيمن. بعد ذلك ، قم بخفضه في محلول الطبق أثناء تطبيق الضغط الإيجابي الناتج عن محول الطاقة الهوائي.
حدد موقع القطب الكهربائي واجلب طرف القطب فوق العينة. باستخدام معالج دقيق ، اخفض طرف القطب الوارد حتى يظل في موضعه فوق cleithrum. قم بزيادة التكبير إلى 40 مرة الغمر وحدد موقع تقاطع العصب الجانبي الخلفي و cleithrum. أحضر طرف القطب فوق العقدة الواردة، وقم بخفض الماصة حتى يلامس الطرف الظهارة. قم بمناورة القطب الكهربائي برفق بحيث يلامس محيط الطرف بالكامل العقدة الواردة.