تسجيل تذبذبات نطاق جاما من الخلايا العصبية لنواة الساقين في شريحة دماغية

ابدأ بإعداد الفيزيولوجيا الكهربية مع قسم دماغي سهمي مغمور في aCSF يحتوي على حاصرات متشابكة.

يتضمن هذا القسم منطقة PPN الغنية بالخلايا العصبية.

تمنع حاصرات التشابك العديد من المستقبلات المثيرة والمثبطة العصبية وقنوات الصوديوم الغشائية ، مما يمنع تداخلها.

املأ ماصة رقعة بمحلول غني بالبوتاسيوم وأدخلها في حامل متصل بقطب تسجيل ومكبر للصوت.

استخدم ضغط هواء إيجابي على الماصة لمنع الانسداد، ثم ضعه بالقرب من خلية عصبية PPN.

ضع شفطا سلبيا لتشكيل ختم محكم مع غشاء الخلايا العصبية واستمر في هذا الشفط حتى ينكسر الغشاء.

قم بتوصيل نبضات التيار الموجب لفتح قنوات الكالسيوم المعتمدة على الجهد ، مما يسمح لأيونات الكالسيوم بالدخول.

وهذا يحفز تذبذبات نطاق جاما, إثارة منخفضة المستوى التي ضرورية لليقظة دون إثارة الخلايا العصبية تماما.

سجل هذه الإشارات عبر ماصة التسجيل لمراقبة تذبذب نطاق جاما.

في هذا الإجراء ، انقل شريحة إلى غرفة الغمر ، ضع حاجزا فوقها لتثبيت الشريحة لأسفل ، وقم بتثبيتها بسرعة 1.5 مل في الدقيقة ، مع احتواء aCSF المؤكسج على مضاد المستقبل المحدد.

من أجل عزل خصائص الغشاء الجوهري ، ما عليك القيام به هو منع الانتقال المشبكي السريع حول الخلية ، وكذلك منع القدرة على توليد إمكانات الفعل. لذلك عليك استخدام حاصرات التشابك والسموم الرباعية أو TTX من أجل منع إمكانات العمل. بهذه الطريقة ، فإن الخلية التي تقوم بترقيعها هي التي تولد هذه الخصائص ، ولا يوجد مدخل متشابك مسؤول عنها ، وهذا ما ندرسه هنا - خصائص الغشاء الجوهري.

بعد ذلك ، املأ ماصة تصحيح التسجيل بمحلول عالي البوتاسيوم داخل الخلايا. أدخل الماصة في حامل مرحلة الرأس. بعد ذلك، استخدم ضغطا إيجابيا صغيرا باستخدام حقنة سعة 1 ملليلتر متصلة بحامل الماصة. باستخدام هدف 4x جنبا إلى جنب مع بصريات تباين التداخل التفاضلي القريب من الأشعة تحت الحمراء ، حدد موقع نواة PPN ، وهي ظهرية للساق المخيخية العلوية.

ببطء، اخفض ماصة التسجيل إلى نواة PPN باستخدام معالج دقيق ميكانيكي. بعد ذلك، ضع ماصة التسجيل في PPN pars compacta، والتي تقع مباشرة في الطرف الخلفي من السويقة. باستخدام عدسة غمر في الماء 40x، اجعل ماصة التسجيل ملامسة خلية NPN العصبية، وقم بتطبيق الشفط السلبي بسرعة لتشكيل ختم مع الخلية.

استخدم برنامج مانع التسرب بمشبك الجهد لمراقبة مقاومة الماصة أثناء الشفط السالب. ثم قم بزيادة الضغط السلبي ببطء. عندما تصل قيمة مقاومة الماصة إلى 80 إلى 100 ميغا أوم، قم بتغيير إمكانات التثبيت بسرعة إلى 50 مللي فولت تحت الصفر وحرر الضغط السلبي.

قم بتطبيق الضغط السلبي بشكل مستمر حتى يتمزق غشاء الخلية ويتم تحقيق الوصول الكهربائي في تكوين الخلية بأكملها. قبل الشفط ، تكون المقاومة منخفضة. في هذه الحالة ، 2.5 ميغا أوم. عند تطبيق الشفط ، تقل سعة الخطوة نحو الإمساك. عندما يتم تشكيل الختم ، لاحظ أن المقاومة تزداد إلى 167 ميغا أوم.

مع شفط إضافي ، يتم تشكيل gigaseal. تزداد المقاومة لفترة وجيزة إلى 1.2 جيجا أوم قبل الوصول إلى الخلية الكاملة. راقب باستمرار إمكانات غشاء الراحة للخلايا العصبية PPN التي يتم تسجيلها. إذا تحولت إمكانات الغشاء المريح نحو قيم إزالة الاستقطاب أو فرط الاستقطاب ، فاستخدم كمية صغيرة من التيار المباشر للحفاظ على الإمكانات المثلى عند 50 مللي فولت تحت الصفر.