موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:10 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة دماغ فأر ثابتة ملطخة بصبغة حساسة للجهد أو VSD ، جزيئات الفلورسنت التي تندمج في الغشاء العصبي وتستجيب للتغيرات المحتملة في الغشاء.
ضع الشريحة في غرفة التسجيل.
قم بتركيب القطب الأرضي للحصول على مرجع جهد أساسي.
بعد ذلك ، ضع أقطاب التحفيز والتسجيل على الشريحة.
تطبيق نبضة كهربائية.
يحفز النبض الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى فتح قناة الصوديوم ذات الجهد الكهربائي وتدفق أيونات الصوديوم ، مما يؤدي إلى تغيير محتمل الغشاء.
يؤدي هذا إلى جهد فعل ، يقاس بواسطة قطب التسجيل ، ويغير خصائص الفلورسنت ل VSD.
قم بتعريض شريحة الدماغ لطول موجي معين لإثارة VSD وتحفيز انبعاث التألق.
بعد التحفيز ، تغلق قنوات الصوديوم بينما تفتح قنوات البوتاسيوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يعزز تدفق أيونات البوتاسيوم.
هذا يغير إمكانات الغشاء مرة أخرى وبالتالي يغير مضان VSD.
سجل التألق في الوقت الفعلي لتمثيل النشاط العصبي بصريا.
لبدء هذا الإجراء ، قم بتشغيل مكبر الصوت والكمبيوتر ونظام الكاميرا وافتح البرنامج. صب aCSF في أنبوب سعة 50 مل ، وقم بفقاعاته بالكربوجين. استخدم مضخة تمعجية لتدوير aCSF ، واضبط معدل التدفق على ما يقرب من مليلتر واحد في الدقيقة.
بعد ذلك، اضبط ارتفاع ماصة الشفط بحيث يكون مستوى السائل داخل غرفة التجربة ثابتا دائما. ضع القطب الأرضي في الغرفة. بعد ذلك ، املأ القطب الزجاجي بكمية صغيرة من aCSF ، وضعه في حامل القطب. نعلق حامل على قضيب مناور.
باستخدام مكبر للصوت ، تأكد من أن مقاومة القطب الكهربائي تبلغ حوالي 1 ميغا أوم. في جلسة التسجيل ، انقل شريحة من الغرفة الرطبة إلى غرفة تجريبية. اضغط على حافة الحلقة بقوة في حلقة O السيليكونية. احرص على عدم كسر الغشاء أو الجزء السفلي من غرفة التجربة.
تحت المجهر ، ضع طرف القطب المحفز وقطب تسجيل جهد المجال على الشريحة. تحقق من الاستجابة المستحثة عن طريق تقديم محفز. تأكد من أن مجال الرؤية يغطي الدائرة العصبية اليمنى في نظام التسجيل البصري.
بعد ذلك ، اضبط شدة ضوء الإثارة على حوالي 70٪ إلى 80٪ من السعة القصوى للكاميرا. باستخدام مصدر ضوء الفلورسنت ، اضبط التركيز باستخدام نظام الاستحواذ. بعد ذلك ، ابدأ التسجيل ، وقم بتحليل البيانات في برنامج الحصول على الصور بعد الاستحواذ.