موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:27 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بفأرة تتحرك بحرية باستخدام قنية ألياف بصرية مزروعة.
قم بتوصيل أحد طرفي سلك تصحيح الألياف الضوئية بالقنية والطرف الآخر بمصدر ضوء الإثارة.
يعبر الفأر عن مؤشر الكالسيوم المشفر وراثيا الفلوروفور الأخضر ، أو GECI ، في منطقة ما تحت المهاد الجانبية ، أو الخلايا العصبية LHA.
تتصل الألياف البصرية المزروعة بمنطقة الهابينولا الجانبية ، أو LHb ، حيث تنتهي محاور LHA.
قم بإثارة GECI بطولها الموجي الأمثل للإثارة وسجل إشارة خط الأساس.
الآن ، ضع نفخات الهواء المتكررة على الماوس لإثارة استجابة الإجهاد البغيضة.
يؤديهذا الحافز إلى تشغيل إمكانات العمل في أطراف محور LHA ، مما يفتح قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ويسمح بتدفق الكالسيوم.
ترتبط أيونات الكالسيوم داخل الخلايا ب GECI ، مما يؤدي إلى تغيير توافقي يزيد من انبعاث التألق الأخضر.
تصور الإشارة الضوئية.
تؤكدزيادة التألق استجابة لنفث الهواء في الفأر دور مسار LHA-LHb في إرسال الإشارات البغيضة.
ابدأ بفحص الطرف البعيد لألياف سلك التصحيح بالعين ، وباستخدام مجهر ألياف صغير. إذا تم خدش سطح الألياف ، فقم بإعادة تلميع الألياف باستخدام فيلم تلميع الألياف بحبيبات دقيقة. بعد ذلك ، نظف الأطراف البعيدة لسلك التصحيح باستخدام 70٪ من الإيثانول وقضيب من القطن. نظف قنيات الألياف البصرية باستخدام 70٪ من الإيثانول وقضيب رأس قطني.
قم بتوصيل الطرف الطويقي لسلك التصحيح بالألياف المزروعة باستخدام غلاف منقسم من السيراميك مغطى بأنبوب انكماش أسود. أثناء الاتصال ، تأكد من أن الكم ضيق. اسمح للحيوان بالتعافي لبضع دقائق ، ثم ابدأ في تسجيل الإشارة الضوئية وقم بإجراء التجربة. أثناء التسجيل ، راقب بعناية التتبع المباشر لضمان جودة التسجيلات ، وراقب أي قفزات في الإشارة تشير إلى أن الغلاف ليس ضيقا بدرجة كافية.