موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:05 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة دماغ فأر منقولة ثابتة في غرفة تسجيل الفيزيولوجيا الكهربية مليئة ب aCSF المؤكسج.
تحتوي هذه الشريحة على أطراف محورية للخلايا العصبية المهادية تعبر عن القنوات الأيونية الحساسة للضوء المدمجة في بروتين الفلورسنت.
تصور محاور الخلايا العصبية المهادية الفلورية وحدد خلية عصبية هرمية.
تقدم ماصة تسجيل تحتوي على قطب كهربائي في محلول داخل الخلايا باتجاه الخلايا العصبية المحددة بضغط إيجابي طفيف.
يخلق الضغط الإيجابي غمازة على الغشاء العصبي عند ملامسته.
حرر الضغط لتشكيل ختم عالي المقاومة.
اضبط جهد الغشاء على قيمة سالبة ثابتة.
قم بتطبيق نبضة ضغط سلبية لتمزيق الغشاء ، وتحقيق تكوين خلية كاملة.
تضيء أطراف المحور العصبي ، وتنشيط القنوات الحساسة للضوء وإزالة استقطاب الأغشية العصبية ، مما يؤدي إلى إمكانات العمل.
يتم إطلاق الناقلات العصبية المثيرة ، وترتبط بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية المسجلة ، مما يتسبب في تدفق الكاتيون.
سجل التيارات المثيرة بعد التشابك الناتجة ، مما يشير إلى وجود اتصال متشابك مباشر بين الخلايا العصبية.
لإجراء تسجيل مشبك التصحيح للخلية الكاملة ، انقل شريحة دماغية تحتوي على مركب الحصين برفق إلى غرفة التسجيل. قم ببث غرفة التسجيل باستمرار ب 34 درجة مئوية ACSF فقاعات مع الكربوجين بسرعة 2 إلى 3 ملليلتر في الدقيقة. افحص بإيجاز تعبير الكرونوس GFP في أطراف المحاور المحورية في منطقة الاهتمام باستخدام إضاءة LED زرقاء بتكبير 4x.
قم بالتغيير إلى هدف الانغماس بمعدل 63 ضعفا واضبط التركيز. تحقق من المحاور التي تعبر عن Chronos GFP واختر خلية عصبية هرمية لتسجيل التصحيح. بعد ذلك ، املأ ماصة بمحلول داخلي قائم على غلوكونات البوتاسيوم. قم بتثبيته في حامل الماصة على مرحلة الرأس. قم بتصحيح الخلية في تكوين مشبك الجهد.
اقترب من الخلية العصبية المحددة واضغط برفق على طرف الماصة على السوما. يجب أن ينتج الضغط الإيجابي غمازة على سطح الغشاء. ثم حرر الضغط لإنشاء ختم جيجا أوم. بمجرد إغلاقها ، اضبط جهد التثبيت على 65 مللي فولت تحت الصفر.
كسر الغشاء بنبض حاد من الضغط السلبي. سجل في الاستجابات اللاحقة للمشبكي الحالي أو الجهد إلى 475 نانومتر LED تحفيز المجال الكامل للألياف الواردة التي تعبر عن الكرونوس. تحفيز بقطارات من 10 محفزات لمدة 2 مللي ثانية عند 20 هرتز.