التقييم القائم على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة للشبكات العصبية في شرائح الحبل الشوكي للفأر

خذ مصفوفة أقطاب كهربائية دقيقة ، أو MEA ، جيدا ، تحتوي على aCSF. ضع شريحة الحبل الشوكي للفأر في البئر وثبتها بشبكة مرجحة.

ضع MEA جيدا في نظام التسجيل. تحت المجهر ، تأكد من أقصى اتصال بين أقطاب MEA والقرن الظهري السطحي أو SDH ، وهي منطقة غنية بالخلايا العصبية الداخلية.

حافظ على تدفق مستمر للنسجة الدماغية الدماغية لتوازن الأنسجة.

تتواصل الخلايا العصبية من خلال إمكانات العمل. يؤدي تدفق أيونات الصوديوم إلى إزالة استقطاب الغشاء ، يليه تدفق أيون البوتاسيوم الذي يسبب إعادة الاستقطاب. يفرط الاستقطاب في الغشاء لفترة وجيزة ، مما يمنع إمكانات عمل جديدة حتى يتم استعادة إمكانات الراحة.

سجل النشاط العصبي التلقائي من أقطاب MEA. تشير الإشارات المتزامنة عبر أقطاب كهربائية متعددة إلى شبكة من الخلايا العصبية المرتبطة متشابكيا.

إدخال مثبط قناة البوتاسيوم لإطالة إزالة الاستقطاب الذي يؤدي إلى زيادة تردد جهد الفعل والنشاط الإيقاعي المتزامن عبر الشبكة.

تشير المزيد من الأقطاب الكهربائية التي تظهر إشارات متزامنة إلى النشاط المتزامن بوساطة المثبط.

لبدء تسجيل نشاط القرن الظهري، انقل الشريحة من الحاضنة إلى بئر الشرق الأوسط وأفريقيا باستخدام ماصة باستور ذات طرف كبير مملوءة بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي، وأضف السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي الإضافي.

استخدم فرشاة رسم دقيقة ذات شعر قصير لوضع الشريحة فوق مجموعة التسجيل المكونة من 60 قطبا. بعد ذلك ، ضع شبكة مرجحة فوق الأنسجة لتثبيتها في مكانها وتعزيز الاتصال الجيد بأقطاب MEA.

ضع MEA في مرحلة رأس التسجيل. تحقق من موضع الأنسجة فوق الأقطاب الكهربائية باستخدام مجهر مقلوب للتأكد من أن أكبر عدد ممكن من الأقطاب الكهربائية تحت DH السطحي. تأكد من أن اثنين إلى ستة أقطاب كهربائية على الأقل لا تلامس الشريحة.

بعد توصيل الكاميرا بالجهاز، التقط صورة مرجعية للشريحة بالنسبة إلى MEA لاستخدامها أثناء التحليل. ثم اضغط على بدء DAQ في برنامج التسجيل وتأكد من أن جميع الأقطاب الكهربائية تتلقى إشارة واضحة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل خطوط مدخل ومخرج التروية ب MEA المملوءة جيدا بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي ، وقم بتشغيل نظام التروية. تحقق من معدل التدفق وتأكد من أن التدفق الخارج كاف لمنع فيضان الصحف الفائق. بعد موازنة الأنسجة لمدة خمس دقائق ، سجل بيانات خط الأساس الأولية لمدة خمس دقائق.

انقل خط مدخل التروية من السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي إلى محلول 4-أمينوبيريدين ، وانتظر لمدة 12 دقيقة حتى يصل النشاط الإيقاعي الناجم عن 4-أمينوبيريدين إلى حالة مستقرة. بعد ذلك ، سجل خمس دقائق من النشاط الناجم عن 4-أمينوبيريدين ، وكن مستعدا للتسجيلات اللاحقة لاختبار الأدوية أو التحقق من استقرار 4-أمينوبيريدين.