موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:14 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة إكليلية ثابتة من الفأر معدلة وراثيا في غرفة تسجيل مليئة بمخزن مؤقت مؤكسج.
تحتوي الشريحة على المنطقة المخططة ، التي تحتوي على الخلايا العصبية الداخلية المعاد برمجتها من الخلايا السلائف قليلة التغصن التي تتميز بعلامة الخلايا العصبية الداخلية وتعبير البروتين الفلوري.
قم بتجميع ماصة تسجيل تتكون من قطب كهربائي مغمور في محلول داخل الخلايا.
تحديد الخلايا العصبية الداخلية الفلورية مجهريا.
حافظ على ضغط إيجابي في الماصة ودفعها نحو الخلايا العصبية الداخلية المستهدفة ، مع ملامسة الغشاء.
اضغط السلبي لتشكيل ختم عالي المقاومة.
قم بتطبيق نبضات الضغط السلبي لكسر الغشاء ، وإنشاء تكوين خلية كاملة.
الحفاظ على إمكانات غشاء الخلايا العصبية الداخلية عند قيمة سالبة ثابتة.
قم بتطبيق تيارات إضافية قصيرة ، وفتح القنوات الأيونية وتغيير إمكانات الغشاء ، مما يؤدي إلى جهد فعل.
في النهاية ، يعود الغشاء إلى إمكانات الراحة.
لاحظ هذه التغييرات في إمكانات الغشاء استجابة للحقن الحالي ، مما يشير إلى نضوج الخلايا العصبية وإعادة البرمجة الناجحة.
بعد نقل قسم واحد من الأنسجة إلى غرفة تسجيل الفيزيولوجيا الكهربية ، قم بتركيب الماصة الزجاجية على قطب التسجيل ، وخفضها في المحلول. تحقق مرة أخرى من مقاومة القطب. بعد ذلك ، اقترب ببطء من الخلية المعاد برمجتها باستخدام الماصة ، مع الحفاظ على ضغط إيجابي طفيف في القطب لتجنب سد الطرف ، وتأكد من أن الخلية إيجابية GFP قبل التصحيح.
عندما يتم تصحيح الخلية ، حافظ على الخلية في المشبك الحالي من سالب 60 إلى 70 مللي فولت تحت الصفر ، وحقن تيارات 500 مللي ثانية من سالب 20 إلى زائد 90 بيكوأمبير بزيادات 10 بيكوأمبير للحث على إمكانات العمل. هذا يدل على نضوج الخلايا العصبية وإعادة البرمجة الناجحة.