JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:45 د • July 8th, 2025
ضع شريحة من الحبل الشوكي للفئران في غرفة التسجيل وثبتها بمرساة أنسجة.
قم بتنقية الشريحة بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي.
تحت المجهر ، حدد مادة الجيلاتينوزا الشفافة أو منطقة SG واختر خلية عصبية SG سليمة.
ضع ماصة رقعة مملوءة بمحلول أيوني بالقرب من الخلية العصبية.
استخدم ضغطا إيجابيا خفيفا لإزالة أي حطام من طرف الماصة.
حرك الماصة باتجاه الخلية العصبية.
بعد ذلك ، حرر الضغط الإيجابي لتشكيل غمازة على الغشاء العصبي ، مما يؤدي إلى إنشاء ختم.
قم بتغيير إمكانات الاحتفاظ لتقريبها من إمكانات الغشاء المريح ، أو RMP.
استخدم شفطا قصيرا لتمزق الغشاء ، مما يؤدي إلى تكوين الخلية الكاملة.
في RMP ، قم بتطبيق نبضات كهربائية مزيلة للاستقطاب.
تفتح هذه النبضات قنوات الصوديوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يسمح بتدفق سريع لأيونات الصوديوم.
يؤدي هذا التدفق للأيونات إلى جهد فعل ، مما يؤدي إلى إطلاق الخلايا العصبية.
سجل أنماط إطلاق الخلايا العصبية.
لإجراء تسجيلات مشبك رقعة للخلية بأكملها من الخلايا العصبية الجيلاتينية أو SG ، استخدم المحاليل داخل الخلايا القائمة على أيون البوتاسيوم للتسجيل ، مع تطبيق محلول قائم على كاتيون السيزيوم فقط لتسجيل التيارات المثبطة بعد المشبكي.
حرك شريحة الحبل الشوكي برفق إلى غرفة التسجيل ، ثم قم بتثبيتها بإحكام باستخدام سلك بلاتيني على شكل حرف U مع خيوط من النايلون ، للحصول على ثبات مثالي للشريحة. قم ببث الشريحة بثبات باستخدام ACSF فقاعي في درجة حرارة الغرفة ، واضبط معدل التروية على 2 إلى 4 ملليلتر في الدقيقة لتحقيق أكسجين كاف.
بعد ذلك ، باستخدام عدسة مجهرية منخفضة الدقة ، حدد منطقة الخلايا العصبية SG كنطاق شفاف. اختر خلية عصبية سليمة ، تتميز بشكل ثلاثي الأبعاد مع غشاء لامع وسلس ، كخلية مستهدفة ، باستخدام الهدف عالي الدقة ، وضبطها على مركز شاشة شاشة الفيديو.
املأ ماصة دقيقة بحجم مناسب من المحلول داخل الخلايا القائم على أيون البوتاسيوم أو أيون السيزيوم. بعد ذلك، أدخل الماصة الدقيقة في حامل القطب الكهربائي، وتأكد من أن المحلول داخل الخلايا يلامس السلك الفضي داخل الحامل. اجعل الماصة الدقيقة في بؤرة التركيز ، واستخدم المعالج الدقيق لغمرها في ACSF. استخدم ضغطا إيجابيا خفيفا لإبعاد أي أوساخ وحطام.
حرك الماصة الدقيقة تدريجيا نحو الخلية العصبية المستهدفة. بمجرد أن تقترب الماصة من الخلايا العصبية ، وتتشكل غمازة صغيرة جدا على الغشاء العصبي ، حرر الضغط الإيجابي لتشكيل جيجاسيل. قم بتغيير إمكانات الاحتفاظ إلى سالب 70 مللي فولت ، وهو قريب من إمكانات غشاء الراحة الفسيولوجية للخلية.
بعد ذلك، قم بتطبيق شفط عابر ولطيف على الماصة الدقيقة لتمزيق الغشاء وإنشاء تكوين جيد للخلية الكاملة. سجل خصائص إطلاق النار عن طريق اختبار نمط إطلاق النار لكل خلية عصبية في المشبك الحالي بسلسلة من نبضات تيار إزالة الاستقطاب مدتها ثانية واحدة من 25 إلى 150 بيكو أمبير بزيادات 25 بيكوأمبير عند إمكانات الغشاء المريح.