JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:23 د • July 8th, 2025
تحكم في اليرقات المعدلة وراثيا لذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة.
تعبر اليرقات المعدلة وراثيا عن قناة أيونية حساسة للضوء في الخلايا العصبية المستقبلة الشمية أو ORNs. هذه الخلايا العصبية هي جزء من الدائرة الشمية ، التي تكتشف محفزات الرائحة وتنقل الإشارات إلى الدماغ ، وتوجه حركة اليرقات استجابة للمنبهات.
ضع اليرقات على طبق به الاغاروز المتصلب داخل ساحة السلوك ، وقم بتغطية الطبق.
قم بتعريض اليرقات لطول موجي من الضوء يحفز القنوات الأيونية ويسجل سلوك اليرقات الملاحية.
ينشط الضوء الشبكية بالكامل ، وهو الكروموفور ، الذي يحفز فتح القنوات الأيونية ، والمعروف باسم التحفيز البصري الوراثي ، ويسمح بتدفق الكاتيون.
يولد التدفق إمكانات عمل تنقل الإشارات على طول الدائرة الشمية ، مما يؤثر على السلوك الملاحي لليرقات.
تظهراليرقات المعدلة وراثيا ذات القنوات الأيونية الحساسة للضوء تغيرا في المسافة المقطوعة في خط مستقيم قبل تغيير الاتجاه ، والمعروف باسم طول الجري ، مقارنة باليرقات الضابطة.
بالنسبة لمقايسة السلوك ، حافظ على درجة حرارة ورطوبة ثابتة في غرفة السلوك. قم بإعداد وسط زحف اليرقات عن طريق سكب 150 مل من الاغاروز المذاب بنسبة 1.5٪ في طبق بتري بحجم 22 سم × 22 سم مربع.
اترك الاغاروز يتماسك ويبرد لمدة 1 إلى 2 ساعة في أطباق بتري ، قبل استخدامها في مقايسة السلوك. بعد أن تصلب الاغاروز ، لا تنقل أكثر من 20 من يرقات الطور الثالث المحضرة إلى وسط طبق بتري وقم بتغطية طبق بتري بغطاءه.
ضع طبق بتري في ساحة السلوك أسفل كاميرا CCD. قم بتشغيل مصدر ضوء LED بالأشعة تحت الحمراء 850 نانومتر لتصور اليرقات في الفيديو. ابدأ تشغيل كاميرا CCD لتسجيل حركة اليرقات. أخيرا ، انتقل إلى معالجة البيانات وتحليلها.