موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:27 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شرائح دماغ الحصين الفأرية التي تحتوي على الخلايا العصبية CA3 المصابة بناقل فيروسي مؤتلف.
يعبر الجينوم الفيروسي عن قناة يتم تنشيطها بالضوء وعلامة بمراسل فلورسنت وميكرو RNA يقلل من تنظيم التعبير عن قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي.
ضع شريحة في غرفة التسجيل في ظروف مظلمة. باستخدام المجهر ، حدد الخلايا العصبية CA3 الفلورية.
قم بتصحيح قطب تسجيل على خلية عصبية CA1 تتلقى مدخلات من الخلايا العصبية CA3 المصابة. تمزق الغشاء لتسجيل التيارات الأيونية داخل الخلايا.
تطبيق مثبط لمنع مستقبلات الناقل العصبي المثبطة, السماح فقط الإشارات مثيرة.
باستخدام نبضات الضوء ، قم بتحفيز القنوات التي يتم تنشيطها بالضوء في الخلايا العصبية CA3 المصابة ، مما يولد إمكانات العمل.
في الفئران غير المصابة ، ينشط جهد الفعل قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يتسبب في تدفق أيونات الكالسيوم التي تؤدي إلى إطلاق الناقل العصبي. تؤدي الناقلات العصبية إلى تشغيل تيارات ما بعد المشبكي المثيرة ، أو EPSCs ، في الخلايا العصبية CA1.
في الفئران المصابة ، يؤدي التقليل بوساطة الحمض النووي الريبي الصغير لقنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي إلى تثبيط EPSC.
بالنسبة لهذا البروتوكول ، استخدم تم حقن rAAV1 / 2 في الدماغ قبل 15 يوما أو أكثر ، وفقا لبروتوكول نشر سابقا من قبل Cetin وشركاه. اعزل الدماغ وعمل شرائح دماغية حادة باستخدام
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية