JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:11 د • July 8th, 2025
ضع طبق بتري يحتوي على يرقة ذبابة الفاكهة المقطعة مع العضلات المكشوفة والفروع العصبية على مرحلة المجهر.
أدخل قطبا كهربائيا مرجعيا في محلول الاستحمام داخل طبق بتري.
املأ قطب تسجيل بمحلول متساوي التوتر.
باستخدام معالج دقيق ، ضع هذا القطب فوق عضلة البطن التي تعصبها الخلايا العصبية الحركية.
ضع طرف القطب الكهربائي على عروة متشابكة ، وهي بنية في طرف المحور العصبي تحتوي على ناقلات عصبية.
سجل باستمرار التيارات الوصلية المثيرة المصغرة أو mEJCs ، وهي استجابات لإطلاق ناقل عصبي تلقائي.
يؤكدالنطاق الصحيح لسعة mEJC وضع القطب الكهربائي المناسب.
بعد ذلك ، ضع قطب تحفيز بالقرب من المحور العصبي الذي يعصب العضلة المستهدفة.
استخدم ضغطا سلبيا لسحب المحور العصبي داخل القطب.
قم بزيادة تيار التحفيز تدريجيا للحث على جهد الفعل.
يؤدي هذا إلى إطلاق المحور العصبي لإطلاق الناقلات العصبية عند التقاطع العصبي العضلي ، والتي يتم تسجيلها كتيارات متشابكة.
ضع طبق بتري مع التحضير على مرحلة المجهر. أدخل القطب المرجعي في الحمام. املأ قطب التسجيل بمحلول HL3. تحت هدف 10x ، اغمر القطب في الحمام ، وضعه فوق العضلات ستة وسبعة من أجزاء البطن 2 أو 3 أو 4 باستخدام المعالج الدقيق.
بعد ذلك ، قم بتبديل الهدف إلى 60X وركز على مجال الاهتمام باستخدام بصريات epi-florescence أو DIC. ضع طرف القطب الكهربائي أعلى العروات المشبكية ، ثم اضغط على القطب برفق شديد على العضلات لأن الضغط المفرط قد يؤدي إلى إتلاف NMJ أو زيادة النشاط المشبكي التلقائي.
بعد ذلك ، قم بتشغيل مكبر الصوت ولوحة AD والكمبيوتر. ثم اختر وضع مشبك الجهد على مكبر الصوت. ابدأ برنامج الاستحواذ ، واختر الوضع الخالي من الفجوات ، ولاحظ ظهور mEJCs على شاشة الكمبيوتر. تأكد من أن اتساع mEJCs يتراوح بين 0.2 إلى 0.7 نانو أمبير.
باستخدام مناور دقيق تحت تحكم بصري ، ضع قطب التحفيز بالقرب من أجزاء البطن المؤمرة للمحور العصبي من 2 إلى 4. قم بالضغط السلبي عن طريق سحب مكبس المحقنة المتصل بحامل القطب الكهربائي ، بحيث يتم سحب المحور العصبي داخل القطب.
بعد ذلك قم بتشغيل المحفز. أدر المقبض الموجود على وحدة العزل لضبط تيار صفري ، ثم قم بزيادته برفق حتى تظهر EJCs ، أو حتى يتم الوصول إلى العتبة. قم بإجراء التحفيز في نظام فوق العتبة ، مع زيادة تيار التحفيز مرتين تقريبا مقارنة بعتبة مراقبة EJCs.