موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:43 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بالخلايا البطانية الوعائية الدماغية أو خلايا مكافحة التطرف العنيف في وسط الاستزراع.
خلايا مكافحة التطرف العنيف هي خلايا عالية الطلب للطاقة تبطن الأوعية الدموية في الدماغ وهي ضرورية لفسيولوجيا الدماغ.
ضع الخلايا في لوحة ثقافة خلية التدفق خارج الخلية. احتضان لمرفق الخلية.
استبدل وسائط الثقافة بوسائط فحص التدفق خارج الخلية التي تحتوي على درجة الحموضة المطلوبة.
احتضان بدون ثاني أكسيد الكربون للحفاظ على درجة الحموضة.
بعد ذلك ، خذ خرطوشة مستشعر التدفق خارج الخلية ، والتي تتضمن مستشعرات ولوحة سفلية.
أضف محلول معايرة إلى اللوحة واحتضنه بدون ثاني أكسيد الكربون لترطيب المستشعرات.
يمكن لهذه المستشعرات قياس التغيرات في تركيز الأكسجين في البيئة خارج الخلية ، مما يدل على نشاط الميتوكوندريا.
بعد ذلك ، قم بتحميل الخرطوشة في جهاز محلل حيوي ومعايرة المستشعرات.
استبدل اللوحة السفلية باللوحة التي تحتوي على الخلايا.
قياس وظيفة الميتوكوندريا لخلايا مكافحة التطرف العنيف
بعد العدد المناسب من المزارع الفرعية ، قم بزرع 1.6 × 104 خلايا في 80 ميكرولتر من الوسط الكامل لكل بئر على لوحة ثقافة خلية تدفق خارج الخلية 96 بئرا وضع اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
في اليوم السابق لمقايسة التقييم الوظيفي للميتوكوندريا ، قم بترطيب خرطوشة مستشعر التدفق خارج الخلية ب 150 ميكرولتر من محلول العيار خارج الخلية ، واحتضان اللوحة طوال الليل عند 37 درجة مئوية بدون ثاني أكسيد الكربون.
في صباح اليوم التالي ، استخدم محطة غسيل الألواح لتغيير وسط زراعة الخلية إلى وسط فحص التدفق خارج الخلية بدرجة الحموضة 7.0 ، ثم احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية بدون ثاني أكسيد الكربون لمدة 30 إلى 60 دقيقة. عندما تكون الخلايا متوازنة ، قم بتحميل الخرطوشة المائية في المحلل الحيوي ، وانقر فوق الزر "ابدأ" لبدء المعايرة.
في نهاية المعايرة، انقر فوق موجه إلغاء قفل الخرطوشة لإزالة اللوحة السفلية للخرطوشة، وقم بتحميل لوحة الخلية، ثم افتح ملف البيانات للحصول على قيم المعدل من المحلل الحيوي للتصدير إلى ملف جدول البيانات.