موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:34 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شريحة إكليلية من العضو الصوتي الحسي الكيميائي من فأر معدل وراثيا يعبر عن الخلايا العصبية الحسية المسماة بالفلورسنت.
تحتويالظهارة الحسية على هذه الخلايا العصبية المسماة ، والتي تتعرض للتجويف المتصل بتجويف الأنف لاستشعار الإشارات الكيميائية.
قم بتأمين الشريحة في غرفة التصوير باستخدام مرساة شرائح.
انقل الغرفة إلى إعداد التسجيل وتدفق محلول خارج الخلية المؤكسج للحفاظ على بقاء الأنسجة.
ضع ماصة التروية بالقرب من الشريحة لإدخال محفزات كيميائية وماصة تسجيل فوق الخلايا العصبية الحسية.
باستخدام المجهر الفلوري ، حدد الخلايا العصبية المسماة.
استخدم ضغطا إيجابيا لمنع انسداد الماصة ، واقترب من الخلايا العصبية حتى تتشكل غمازة على الغشاء.
قم بالتبديل إلى الضغط السلبي ، واسحب الغشاء إلى الماصة.
قم بتطبيق الشفط لتمزيق الغشاء وإنشاء استمرارية مع السيتوبلازم ، والذي يسمى مشبك التصحيح للخلية الكاملة ، مما يسمح بإدخال المحفزات الكيميائية وتسجيل الإشارات الفيزيولوجية الكهربية الناتجة.
انقل شريحة VNO إلى غرفة التصوير ، وقم بإصلاح موضع الشريحة باستخدام مرساة من الفولاذ المقاوم للصدأ سلكية بألياف تركيبية بسمك 0.1 ملم. لا تغطي شريحة المناديل بأي من خيوط الألياف الاصطناعية. بعد ذلك ، انقل غرفة التصوير إلى إعداد التسجيل ، وقم بدمج الشريحة باستمرار مع S2 المؤكسج في درجة حرارة الغرفة.
اضبط الشعيرات الدموية للشفط على سطح المحلول لإنشاء تبادل مستمر لمحلول الحمام. بعد ذلك ، اضبط قلم التروية متعدد الأسطوانات 8 في 1 أعلى وبالقرب من الجزء غير الحسي من شريحة VNO التي تحتوي على الأوعية الدموية. بعد ذلك ، قم بتوصيل القطب المرجعي ومحلول الحمام باستخدام جسر أجار على شكل حرف L مملوء بكلوريد البوتاسيوم 150 ملليمول.
بعد ذلك، املأ ماصة التصحيح بمحلول الماصة S4. قم بتركيب الماصة فوق القطب الكهربائي المطلي بكلوريد الفضة المتصل بمرحلة الرأس دون كشط الطلاء، وقم بتوصيله بإحكام. بعد ذلك، ضع ضغطا إيجابيا طفيفا على ماصة التصحيح قبل دخول الحمام. راقب الماصة وتأكد من أنها تتراوح بين أربعة ميغا أوم و10 ميغا أوم.
تصور شريحة VNO باستخدام كاميرا CCD باستخدام DIC المحسن بالأشعة تحت الحمراء ، وحدد الخلايا التي تعبر عن FPR-rs3-i-Venus ، أو الخلايا العصبية المصنفة بالمثل باستخدام إضاءة التألق ، ومكعب مرشح مناسب. اقترب من جسم الخلية باستخدام العجلات اليدوية للحصول على أقصى قدر من الحساسية. بسبب الضغط الإيجابي ، يصبح انبعاج صغير على غشاء سوما الخلية مرئيا ، بمجرد أن يكون طرف الماصة على مقربة.
بعد ذلك ، حرر الضغط الإيجابي وقم بتطبيق ضغط سلبي طفيف لامتصاص غشاء الخلية ، من أجل الحصول على ختم مقاومة عالية من 1 إلى 20 جيجا أوم. بعد ذلك ، قم بتطبيق شفط قصير ولطيف لتعطيل غشاء الخلية وإنشاء تكوين الخلية بأكملها.