زرع مجموعة قطب كهربائي في دماغ الفأر للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي

قم بتأمين فأرة مخدرة على إطار تجسيمي يحتوي على وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.

ضع مادة التشحيم لمنع العينين من الجفاف وحقن محلول المنحل بالكهرباء تحت الجلد للحفاظ على الترطيب.

قم بإزالة الفراء من فروة الرأس وتطهير المنطقة وحقن مسكن تحت الجلد لتقليل الألم.

قم بعمل شق لكشف الجمجمة ، ثم قم بتنظيفه لجعل المعالم التشريحية مرئية لتحديد مناطق الدماغ.

ضع لاصقا للأسنان وقم بتقويته باستخدام ضوء المعالجة للمساعدة في زرع القطب.

قم بحفر ثقوب فوق الحصين والمخيخ ، وقم بتركيب مجموعة قطب كهربائي باستخدام حامل على الإطار التجسيمي.

تسجل الأقطاب الكهربائية ثنائية القطب نشاط الحصين ، بينما يحصل القطب المرجعي على نشاط خط الأساس من المخيخ.

أدخل الأقطاب الكهربائية ، وقم بتأمين المجموعة بالأسمنت للأسنان ، وافصلها عن الحامل.

قم بإدارة محلول الإلكتروليت ومسكن مرة أخرى.

اسمح للماوس بالتعافي تماما قبل إجراء التسجيل الفيزيولوجي الكهربي.

قبل الشروع في الجراحة ، سجل وزن فئران VGAT-Cre البالغة من العمر 8 أسابيع. ثم ضع في غرفة الحث للحث على التخدير. ضع الماوس المخدر على وسادة تسخين على 37 درجة مئوية. في حالة استخدام نظام درجة حرارة يتم التحكم فيه عن طريق التغذية المرتدة ، أدخل مسبار درجة الحرارة في مستقيم لمراقبة درجة الحرارة أثناء الجراحة. لبدء الجراحة ، أعد توجيه تدفق التخدير المستنشق إلى مخروط الأنف وقم بتركيب في الإطار التجسيمي عن طريق وضع الأسنان العلوية الأمامية برفق في قضيب القاطعة وحرك المخروط على أنفه ، ثم ضع قضبان الأذن في الأذنين وألصقها على الإطار التجسيمي.

تأكد من أن رأس مستوي ومتمركز ولا يمكن تحريكه عند فحصه قليلا. بمجرد تركيب ، قم بحقن 0.5 مل من نورموزول على الفئران للترطيب وقم بتطبيق مادة تشحيم العين لمنع جفاف القرنية. راقب عمق التخدير عن طريق الضغط على إصبع القدم الخلفي. إذا كان منعكس الانسحاب غائبا في ، فاستمر في إزالة شعر فروة رأس الفأر حول منطقة الجراحة. عند الانتهاء ، قم بتطهير منطقة الجلد النظيفة ثلاث مرات باستخدام تطبيق متناوب من الإيثانول واليود مع اليود ، وحقن 0.05 مل من 0.25٪ بوبيفاكائين تحت الجلد.

قم بعمل شق في الجمجمة باستخدام مشرط ، ثم قم بقطع جزء من الجلد بمقص جراحي يكشف الجمجمة. ادفع الجلد جانبا قبل تنظيف الجمجمة من جميع الأنسجة الأساسية بقطعة قطن. نظف الجمجمة ببيروكسيد الهيدروجين باستخدام مسحات قطنية معقمة ، واجعل خيوط الجمجمة والبريجما واللامدا مرئية. باستخدام المثقاب المجسم ، حرك طرف الحفر على بريجما وإحداثيات صفر x و y و z ، ثم ارفع المثقاب وحرك إلى lambda لتحديد إحداثياته لتحديد ما إذا كان الرأس مستويا أم لا.

بعد تجفيف الجمجمة جيدا ، ضع قطرة واحدة من لاصق الأسنان ذاتي النقش باستخدام أداة التطبيق. انتظر 60 ثانية قبل معالجة لاصق الأسنان بضوء الأشعة فوق البنفسجية للأسنان لمدة 40 ثانية. يشير السطح اللامع إلى أن المادة اللاصقة قد تم ربطها بشكل فعال بالجمجمة. بمساعدة مثقاب 0.031 بوصة ، قم بحفر بئرين بعناية بشكل ثنائي في الجمجمة بسرعة 5,000 دورة في الدقيقة ، أو دورة في الدقيقة ، وتجنب الحفر في الدماغ. ضع قطرة من المحلول الملحي لتعزيز حفر ثقوب النتوءات. لزرع أقطاب عمق الحصين ، قم بالحفر عند 3 ملليمترات خلفية و 3 ملليمترات جانبية من بريجما.

قم بحفر ثقب لدغ واحد للقطب المرجعي فوق المخيخ ، خلف لامدا عند 6 ملليمترات خلفية و 0 ملم جانبيا من بريجما. بعد ذلك ، قم بتركيب قاعدة التمثال ذات الستة دبابيس مع أقطاب كهربائية مجمعة في حامل القطب الكهربائي على إطار تجسيمي. من خلال محاذاة الأقطاب الكهربائية فوق فتحات الأزيز المقابلة ، قم بخفض سماعة الرأس ببطء والتنقل فيها لتحديد موقع طرفي القطب ثنائي القطب أعلى فتحات الشفرات اليسرى واليمنى للحصين ، وإذا لزم الأمر ، اضبط القطب المرجعي لتحوم فوق الفتحة ، فوق

عندما تكون أقطاب الحصين الملتوية فوق الثقوب مباشرة ، قم بصفر المحور z ، وقم بخفض القطب ببطء إلى ناقص ثلاثة ملليمترات في الحصين الأيمن والأيسر ، وقم بتوجيه القطب المرجعي إلى الفتحة فوق المخيخ. تحضير أسمنت الأسنان عن طريق خلط المسحوق والسائل في وعاء الخلط ، ثم قم بتغطية سطح الجمجمة والأقطاب الكهربائية والفراغ بين سطح الجمجمة وأسفل قاعدة التمثال بأسمنت الأسنان.

بمجرد أن يجف الأسمنت ويتصلب ، افصل حامل القطب الكهربائي عن الذراع التجسيمي ، وارفع الذراع ، وقم بإزالة الحامل من قاعدة التمثال. بعد إعطاء الفأر تحت الجلد باستخدام الكيتوبروفين والنورموسول ، قم بإزالة من الإطار التجسيمي لتحريك إلى الوسادة الساخنة في قفص الفيفاريوم. بمجرد الاستيقاظ التام ، أعد الفردي إلى قفص الفيفاريوم ، وأطعم بالطعام الطري ، وراقب فقدان الوزن يوميا لمدة تصل إلى 72 ساعة بعد الجراحة.