موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:17 دقيقة • July 8th, 2025
ضع غطاء يحتوي على ثقافة مشتركة في غرفة تسجيل مملوءة بمحلول مؤكسج خارج الخلية.
تتكون الثقافة المشتركة من الخلايا النجمية ، والخلايا العصبية القشرية للفئران التي تعبر عن القنوات الأيونية الحساسة للضوء المدمجة في بروتين الفلورسنت ، والخلايا العصبية المشتقة من iPSC التي تعبر عن بروتين فلوري آخر.
باستخدام المجهر متحد البؤر ، حدد الخلايا العصبية المشتقة من iPSC الفلورية.
تقدم ماصة تسجيل مملوءة بمحلول داخل الخلايا باتجاه الخلايا العصبية لإنشاء تكوين خلية كاملة.
الحفاظ على إمكانات غشاء سالبة ثابتة لقياسات التيار الدقيقة.
قم بإضاءة الثقافة المشتركة بالضوء لتنشيط القنوات الأيونية الحساسة للضوء في الخلايا العصبية القشرية ، وبالتالي توليد جهد فعل.
يتسبب جهد الفعل في إطلاق الناقل العصبي في الشق المتشابك.
إذا كانت المتصلة متشابكيا ، ترتبط الناقلات العصبية بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية المشتقة من iPSC المصححة ، وتفتح القنوات الأيونية وتولد تيارات ما بعد المشبكي.
زيادة التيارات بعد المشبكي في الخلايا العصبية المشتقة من iPSC بعد تحفيز الضوء تؤكد الاتصالات المشبكية مع الخلايا العصبية القشرية.
استخدم مجهر متحد البؤر مزودا بعدسة غمر الماء بمعدل 60 ضعفا. قم بنشر الخلايا في درجة حرارة الغرفة في محلول خارجي ، فقاعات باستمرار مع 95٪ أكسجين ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون. استخدم محلولا داخليا لملء الماصة الدقيقة للتسجيل.
لإجراء التحفيز البصري الوراثي ، قم بتصحيح خلية tdTomato-إيجابية في وضع الخلية الكاملة واضبط مشبك الجهد على سالب 70 مللي فولت. باستخدام مصباح الزئبق كامل المجال ومرشح الإثارة 480 على 40 ، قم بتحفيز المجال بأكمله لمدة 30 ثانية. سجل التيارات بعد المشبكية ، أو PSCs ، لخلية مرقعة ناتجة عن التحفيز الضوئي للخلايا العصبية القشرية قبل المشبكي التي تعبر عن ChR2.