تصوير إشارات الكالسيوم التي يسببها النيكوتين على طول محاور الحصين البطنية في الثقافات المشتركة المشبكية

خذ الثقافات المشتركة المعدلة وراثيا لشرائح الحصين البطني للفأر والخلايا العصبية للنواة المتكئة على غطاء.

تعرض الخلايا العصبية في الحصين محطات محورية قبل التشابك تفرط في التعبير عن مستقبلات أستيل كولين النيكوتين ، وتشكل نقاط الاشتباك العصبي مع الخلايا العصبية للنواة المتكئة بعد التشابك.

يتم تحميل الخلايا العصبية بصبغة مؤشر الكالسيوم لقياسات الكالسيوم داخل الخلايا.

انقل الغطاء إلى غرفة مجهر متحد البؤر مليئة بمخزن مؤقت يحتوي على أيونات الكالسيوم.

التقط صورا فلورية للإنقاطات المحورية للحصين كعنصر تحكم.

النيكوتين المنفخ ، الذي يرتبط بمستقبلات الأستيل كولين النيكوتين على الخلايا العصبية في الحصين ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم.

ترتبط أيونات الكالسيوم بالصبغة داخل الخلايا ، مما يزيد من التألق.

تطلق محاور الحصين الناقلات العصبية المثيرة ، مما يؤدي إلى الانتقال المشبكي في الخلايا العصبية للنواة المتكئة.

يغسل بمحلول عازل لإزالة النيكوتين.

بمرور الوقت ، يتسبب تنشيط مستقبلات أستيل كولين النيكوتين في إطلاق الكالسيوم من المخازن داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى زيادة مضان الصبغة ويشير إلى إشارات الكالسيوم المستمرة على طول محاور الحصين البطنية.

انقل الثقافات واحدة تلو الأخرى إلى غرفة التصوير. اجمع الصور الفلورية الأساسية للنتوءات المحورية من الشرائح الدقيقة للحصين البطني كتحكم ما قبل النيكوتين.

بعد ذلك