تسجيل إمكانات ما بعد المشبكي المثيرة للمجال العصبي في شرائح الحصين الحادة

ضع شريحة الحصين الفأرية في حجرة غمر مملوءة بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي ، أو aCSF.

قم بتأمين الشريحة بشبكة تثبيت لمنع الحركة.

قم بتدوير aCSF المؤكسج باستمرار للحفاظ على حيوية الخلايا العصبية.

قم بتركيب أقطاب كهربائية مرجعية لتوفير مرجع جهد ثابت.

ضع أقطاب التحفيز والتسجيل بما يتماشى مع الطبقة الهرمية CA1 الحصين وبالتوازي معها.

تطبيق النبضات الكهربائية.

تحفز هذه النبضات الخلايا العصبية ، مما يتسبب في فتح القنوات الأيونية ذات الجهد الكهربائي ، مما يسمح للأيونات الموجبة بالتدفق ، وتحفيز إمكانات العمل.

تنتشر إمكانات العمل هذه على طول الخلايا العصبية وتحفز إطلاق الناقلات العصبية المثيرة في الشق المشبكي.

ترتبط الناقلات العصبية بمستقبلات محددة على الخلايا العصبية بعد المشبكية ، مما يسمح بتدفق الأيونات الإيجابي ويؤدي إلى تغيير في إمكانات الغشاء - إمكانات ما بعد المشبكي المثيرة ، أو EPSP.

يقيس قطب التسجيل EPSP من مجموعة من الخلايا العصبية داخل منطقة التسجيل - حقل EPSP.

انقع مسبقا قطعة صغيرة من ورق تنظيف العدسة وشبكة من النايلون مثبتة على سلك بلاتيني على شكل حرف U في حجرة الشرائح الغاطسة لبضع دقائق. بعد ذلك ، قم بإزالة السلك البلاتيني على شكل حرف U. قم بإيقاف تشغيل إعادة التدوير وضع شريحة على ورق تنظيف العدسة. ثم ضع على الفور شبكة تثبيت الشريحة فوق الشريحة.

قم بتشغيل المضخة ، واترك الشريحة تتوازن لمدة 30 دقيقة دون غمس الهدف في ACSF. في غضون ذلك، املأ قطب التسجيل ب ACSF، وقم بتثبيته في حامل الماصة.

بعد ذلك ، ضع قطب تحفيز التنغستن المعزول بالإيبوكسي الذي تم اختباره في حامل المناور ، والسلك المرجعي في غرفة الشريحة. أضف قطبا مرجعيا ثانيا إلى الغرفة وقم بتوصيله بالمقبس المرجعي لمرحلة الرأس لقطب التسجيل.

في برنامج التحكم في مكبر الصوت ، انقر فوق مربع وضع المشبك الصفري ، ثم انقر نقرا مزدوجا فوق مربع قائمة كسب الإخراج. اختر ربحا قدره 100. انقر نقرا مزدوجا فوق مربع مرشح التمرير العالي. اختر 3 كيلو هرتز وانقر نقرا مزدوجا فوق مربع قائمة مرشحات التمرير المنخفض AC لاختيار 0.1 هرتز.

في برنامج التسجيل ، انقر فوق الحصول على بروتوكول مفتوح. اختر بروتوكولا يحتوي على الإعدادات التي تسمح بالتحفيز العرضي ورقمنة الإمكانات المضخمة من 10 إلى 20 كيلو هرتز لمدة 50 إلى 100 مللي ثانية ، والتي تؤدي تلقائيا إلى عزل محفز بعد 10 مللي ثانية من بدء التسجيل العرضي.

ضع أقطاب التحفيز والتسجيل في خط وبالتوازي مع الطبقة الهرمية. بعد ذلك ، انقر فوق الحصول على بروتوكول تحرير واختر علامة التبويب المشغل في النافذة المنبثقة. انقر فوق مربع مصدر الزناد واختر مفتاح المسافة كمصدر للمشغل. ثم انقر فوق موافق زر وانقر فوق سجل زر لبدء الاستحواذ.

في برنامج عزل التحفيز ، انقر فوق مربع التحكم في الجهد وأدخل صفر. انقر فوق الزر تنزيل. بعد ذلك ، انقر فوق برنامج التسجيل نافذة واضغط على مفتاح المسافة. كرر هذه الدورة عن طريق إدخال القيم بالتتابع من 1,000 إلى 8,000. ربط قوة التحفيز مع قيم منحدر FEPSP وتحديد قوة التحفيز المطلوبة للحصول على 40٪ من الحد الأقصى لمنحدر FEPSP. انقر فوق مربع التحكم في الجهد وأدخل القيمة المحددة. ثم انقر فوق الزر "تنزيل".

في برنامج التسجيل ، انقر فوق قف زر ثم الحصول على قائمة. انقر فوق تحرير البروتوكول واختر علامة التبويب المشغل في النافذة المنبثقة. بعد ذلك ، انقر فوق مربع مصدر الزناد واختر المؤقت الداخلي كمصدر للمشغل. انقر فوق الزر "موافق" ، متبوعا بزر "تسجيل" الذي يبدأ التسجيل التلقائي لإمكانات المجال كل 60 ثانية. انقر فوق الزر "إيقاف" بعد 30 إلى 60 دقيقة.

في برنامج التسجيل، انقر فوق اكتساب البروتوكول المفتوح واختر نفس البروتوكول مثل التسجيل الأساسي. انقر فوق الزر موافق ثم انقر فوق تسجيل. استمر في تشغيل التسجيلات المحتملة في الحقل تلقائيا لمدة ساعتين إلى أربع ساعات. عند الانتهاء ، انقر فوق قف زر لإنهاء التسجيل.