توليد تذبذبات جاما المحلية Cornu Ammonis 1 (CA1) باستخدام محفزات الكزاز في شريحة دماغ الحصين

قم بتأمين شريحة دماغية في غرفة تسجيل مع نضح مستمر من aCSF يحتوي على نسبة عالية من المغنيسيوم الذي يمنع مستقبلات N-methyl-D-aspartate أو NMDA الغلوتامات.

ضع الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل في حصين كورنو أمونيس 1 أو CA1 طبقة رادياتوم.

تحفيز للحصول على إشارة كهربائية ، مما يؤكد الوصلات العصبية السليمة.

أعد وضع القطب المحفز إلى الطبقة oriens وقطب التسجيل إلى الطبقة الهرمية ، ثم أدخلها بشكل أعمق.

تطبيق التحفيز الكزازي, نبضات كهربائية عالية التردد للحث على إطلاق الغلوتامات الناقل العصبي المثير من محاور شافر الجانبية.

يرتبط الغلوتامات بمستقبلات الغلوتامات على الخلايا العصبية CA1 ، مما يسهل تدفق الصوديوم وإزالة الاستقطاب الغشائي

هذا يفتح مستقبلات NMDA ، مما يسمح بتدفق الصوديوم والكالسيوم وتعزيز إثارة الخلايا العصبية.

تطلق الخلايا العصبية الداخلية المثارة في الطبقة oriens الناقل العصبي المثبط GABA ، وتتفاعل مع الخلايا العصبية CA1.

يؤدي هذا التوازن بين المدخلات المثيرة والمثبطة إلى إثارة متزامنة خاضعة للرقابة للشبكة العصبية CA1 ، مما يؤدي إلى توليد موجات دماغية إيقاعية تسمى تذبذبات جاما ، وهي ضرورية للانتباه والذاكرة.

لتركيب الشريحة في غرفة التسجيل ، ضع شريحة دماغية في غرفة تسجيل مغمورة مع تدفق ACSF بسرعة 1 إلى 2 ملليلتر في الدقيقة وتسخينه إلى 32 درجة مئوية. يختلف ACSF المستخدم في التسجيلات عن ذلك الموجود في غرفة الاحتجاز ، حيث يزداد تركيز المغنيسيوم من 2 ملليمولار إلى 4 ملليمولار.

قم بتأمين الشريحة عن طريق وضع وزن نصف دائري من الفولاذ المقاوم للصدأ عليها مع خيوطها الموازية للحصين CA1. بعد ذلك ، قم بزيادة سرعة التروية إلى 8 إلى 10 ملليلتر في الدقيقة عند 32 درجة مئوية.

باستخدام مجهر تشريح ، انقل القطب المحفز إلى منتصف الطبقة oriens. بعد ذلك ، انقل قطب التسجيل إلى الطبقة الهرمية بالقرب من القطب الكهربائي المحفز قدر الإمكان. بعد ذلك ، قم بخفض كل من الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل من 50 إلى 100 ميكرومتر في الشريحة من أجل توليد مجال EPSP من 1 مللي فولت استجابة لنبضة اختبار 120 إلى 150 ميكروأمبير.

لتوليد تذبذبات جاما ، قم بتحفيز الأنسجة بقطار من 20 مرة 0.1 مللي ثانية نبضات يتم تسليمها عند 200 هرتز. يمكن أن ينتج عن هذا المنبه الكزازي استجابات قابلة للتكرار عند تسليمه كل 5 دقائق.