موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:18 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بشريحة دماغ الفئران التي تحتوي على منطقة الخلايا العصبية المستهدفة المتصلة بمحور عصبي حساس للضوء من منطقة دماغية مختلفة.
ضع الشريحة في غرفة التسجيل المغمورة وثبتها بمرساة شريحة.
تحت المجهر ، حدد موقع الطبقة المطلوبة وحدد الخلية العصبية الهرمية المستهدفة.
ارفع هدف المجهر لإنشاء الغضروف المفصلي مع سطح الشريحة.
قم بخفض ماصة زجاجية دقيقة مملوءة بمحلول تسجيل داخل الخلايا في هذا الغضروف المفصلي.
المس الخلية الهرمية المحددة بطرف الماصة لإنشاء مسافة بادئة في الغشاء.
ضع الشفط لتشكيل ختم.
قم بزيادة الشفط حتى يتمزق الغشاء ، مما يؤدي إلى تكوين خلية كاملة.
باستخدام مصدر ضوء مركب ، قم بتطبيق نبضات الضوء على الشريحة.
تؤدينبضات الضوء هذه إلى جهد فعل في المحور العصبي الحساس للضوء ، مما يؤدي إلى إطلاق الناقلات العصبية عند الشق المشبكي.
سجل استجابات الخلايا العصبية الهرمية لهذه الإصدارات لتحليل الكفاءة المتشابكة.
لتحديد الخلية المستهدفة، ضع الشريحة في غرفة التسجيل، وقم بتثبيتها باستخدام مرساة شريحة. تحت التكبير المنخفض ، باستخدام إضاءة الأشعة تحت الحمراء ، انتقل إلى طبقة LEC 5. بعد ذلك ، قم بالتغيير إلى هدف الغمر في الماء عالي التكبير ، وحدد الخلايا العصبية الهرمية.
حدد موضع الخلية على الشاشة بشريط. بعد ذلك ، لتشكيل مشبك تصحيح كامل الخلية ، قم بتصنيع ماصة دقيقة من زجاج البورسليكات ، واملأها بمحلول تسجيل داخل الخلايا. ضع الماصة الدقيقة المملوءة في حامل القطب الكهربائي، وقم بالضغط الإيجابي عن طريق النفخ بقوة في قطعة الفم المتصلة بالمنفذ الجانبي لحامل القطب.
ارفع هدف المجهر بحيث يتشكل الغضروف المفصلي ، وأدخل القطب في الغضروف المفصلي حتى يمكن رؤيته على المجهر. افتح نافذة اختبار مانع التسرب، وحدد ما إذا كانت مقاومة الماصة من ثلاثة إلى خمسة ميغا أوم. بعد ذلك ، المس الخلية المحددة بطرف ماصة مما يؤدي إلى فجوة في غشاء الخلية.
بعد ذلك ، قم بالضغط السلبي عن طريق الشفط في لسان حال ، مما يزيد من مقاومة الماصة. استمر في الضغط السلبي تدريجيا حتى يتمزق غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى عابرات سعة الخلية بأكملها. للدخول إلى تكوين المشبك الحالي ، استخدم مصباح LED مركب موجه إلى مسار ضوء المجهر مع مكعبات المرشح والبصريات المناسبة ، وقم بتطبيق نبضات ضوئية على الشريحة عبر هدف 40x. قم بتوصيل قطارات من نبضات ضوئية متعددة عند 5 هرتز و 10 هرتز و 20 هرتز للتحقيق في خصائص الإطلاق قبل المشبكي.