JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:42 د • July 8th, 2025
ضع مستحضر عصبي عضلي حي من ذبابة الفاكهة في غرفة تسجيل تحتوي على محلول ملحي خال من الكالسيوم.
تعبر الخلايا العصبية اليرقية عن قناة كاتيونية حساسة للضوء.
قم بالتبديل إلى محلول ملحي مضاف إلى الكالسيوم يحتوي على صبغة فلورسنت.
تتألق الصبغة بشكل ضعيف في الحالة غير الداخلية ولكن بقوة عند استيعابها بواسطة الخلايا العصبية.
تضيء اليرقة بالضوء الأزرق.
يؤدي هذا إلى تنشيط القناة ، مما يؤدي إلى تدفق الكاتيون وإزالة الاستقطاب للخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى جهد الفعل.
يصلجهد الفعل إلى الطرف المشبكي عند التقاطع العصبي العضلي ، مما يسمح بتدفق الكالسيوم وإفراز الحويصلة.
بعد ذلك ، يتم استيعاب الغشاء المرتبط بالصبغة أثناء إعادة تدوير الحويصلة.
يغسل بمحلول ملحي خال من الكالسيوم لوقف إعادة تدوير الحويصلات وإزالة أي صبغة غير داخلية.
تصور إشارة التألق.
بعد ذلك ، أدخل محلول ملحي خال من الصبغة مضاف إلى الكالسيوم ويضيء مرة أخرى.
هذا يحفز جهد فعل آخر ، وتدفق الكالسيوم ، وإفراز الحويصلة المحتوية على الصبغة.
تصور الإشارة مرة أخرى.
يقلل إطلاق الصبغة بسبب إفراز الحويصلة من التألق مقارنة بالحالة أثناء استيعاب الحويصلة.
لتحفيز channelrhodopsin ، قم بتوصيل مؤشر LED أزرق بمحفز قابل للبرمجة باستخدام كابل متحد المحور وضع مؤشر LED في منفذ الكاميرا. ركز شعاع ضوء LED الأزرق على المستحضر باستخدام صبغة FM باستخدام وظيفة التكبير المجهري.
تتمثل الخطوة الأكثر أهمية في هذه المرحلة من الإجراء في التأكد من الحفاظ على إعدادات LED ثابتة ، وأنك تضيء نفس الجزء من كل لجميع الظروف التي تتم مقارنتها لضمان قوة تحفيز متسقة.
ابدأ التحفيز الضوئي ، وتتبع باستخدام المؤقت للمدة المحددة مسبقا لفترة التحفيز البصري الوراثي. عندما يتوقف المؤقت ، قم بإزالة محلول صبغة FM بسرعة ، واستبدله بمحلول ملحي خال من الكالسيوم لإيقاف دورة SV. لتفريغ صبغة FM ، ابدأ تحفيز الضوء وتتبع بالمؤقت للمدة المحددة مسبقا لفترة التحفيز البصري الوراثي. عندما تنتهي فترة المؤقت ، قم بإزالة محلول صبغة FM بسرعة ، واستبدله بمحلول ملحي خال من الكالسيوم لإيقاف دورة SV.