موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:50 دقيقة • July 8th, 2025
ضع مزرعة أجسام الخلايا العصبية الحسية للأذن الداخلية في غرفة التسجيل.
املأ ماصة مشبك التصحيح من الأمام بمحلول داخلي.
الردم بنفس المحلول الذي يحتوي على مضاد حيوي مثقب للغشاء ، مما يسمح له بالوصول تدريجيا إلى الحافة.
املأ ثلثي الماصة بمحلول المضادات الحيوية، وأدخلها في حامل يحتوي على قطب كهربائي للتسجيل، ثم قم بخفضها في الغرفة.
تخيل تحت المجهر للاقتراب من الخلايا العصبية.
عندما يلامس طرف الماصة الخلايا العصبية ، يشكل سطح الخلايا العصبية غمازة ، وتزداد المقاومة.
استخدم ضغطا سلبيا لتشكيل مانع تسرب محكم بين الماصة والغشاء.
حافظ على إمكانات الاحتفاظ بالقرب من إمكانات الغشاء المريح.
يثقب المضاد الحيوي الغشاء ، مما يسمح لحركة الأيونات بين الخلية والقطب الكهربائي بإنشاء بيئة أيونية مستقرة.
قم بتطبيق خطوات الجهد لفتح القنوات الأيونية ذات الجهد الكهربائي ، مما يسمح بتدفق الأيونات وتوليد تيارات تتناسب مع وظيفة القناة الأيونية ، والتي يتم تسجيلها بواسطة القطب.
اغمس طرف الماصة في المحلول النظيف لطبق الاستزراع ، لملئه بمحلول نظيف لا يحتوي على الأمفوتريسين. املأ الجزء الخلفي من الماصة بالمحلول الداخلي الذي يحتوي على الأمفوتريسين. اغمس طرف الماصة مرة أخرى في المحلول النظيف لطبق الاستزراع بينما يدخل الأمفوتريسين ببطء إلى الطرف من الجزء الخلفي من الماصة. بعد ذلك، قم بإنهاء ملء الماصة بمحلول الأمفوتريسين حتى 2/3 من الماصة.
اخفض الماصة في حمام غرفة التسجيل، وحدد موقع طرف الماصة في منتصف مجال الرؤية. تأكد من خلو الطرف من فقاعات الهواء أو الحطام الآخر. ضع الماصة بالقرب من الغشاء ، وهبط بقوة في وسط الخلية. استخدم الضغط السلبي أو الشفط باستخدام حقنة أو ماصة فمية.
قم بتشغيل إمكانية الاحتفاظ ب 60 مللي فولت تحت الصفر. يجب أن تزداد مقاومة الختم حتى تمر بجيجا أوم. بمجرد تشكيل ختم جيجا أوم ، حرر الضغط السلبي. يبدأ الأمفوتريسين في العمل. تقل مقاومة الإدخال ببطء ، ويزداد التيار المتدفق استجابة لخطوة الجهد 5 مللي فولت تدريجيا مع دخول الأمفوتريسين إلى الغشاء.