موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:11 دقيقة • July 8th, 2025
خذ العقد الجذرية الظهرية للفئران المجمدة ، أو DRG ، في غرفة تسجيل مليئة ب aCSF.
يحتوي DRG على خلايا عصبية حسية محاطة بخلايا دبقية عبر الأقمار الصناعية.
ضع ضغطا إيجابيا على ماصة رقعة مملوءة بمحلول داخل الخلايا ومتصلة بمكبر للصوت ، ثم ادفعها نحو الخلية العصبية المستهدفة.
يساعد الضغط الإيجابي على اجتياز طبقة الخلايا الدبقية المحيطة بالقمر الصناعي والاتصال بالخلايا العصبية ، مما يشكل فجوة على غشاءها.
ضع ضغطا سلبيا لتشكيل ختم محكم بالغشاء.
بعد ذلك ، قم بتطبيق نبضات الضغط السلبي لإنشاء تكوين الخلية بأكملها. معايرة معلمات مكبر الصوت لقياسات إشارة دقيقة.
لتحديد استثارة الخلايا العصبية ، قم بتطبيق تيارات تدريجية قصيرة في الخلايا العصبية ، وفتح القنوات الأيونية ذات الجهد الكهربائي وتحفيز جهد الفعل.
قم بقياس القاعدة الذاتية ، وهو الحد الأدنى للتيار اللازم لتحفيز جهد الفعل.
علاوة على ذلك ، قم بتطبيق تيار منحدر لقياس الحد الأدنى من إمكانات الغشاء التي يحدث عندها جهد الفعل.
في هذا الإجراء ، ضع محلول القطب الكهربائي على الجليد لمنع التدهور. بعد ذلك ، املأ الماصة الزجاجية بمحلول مفلتر داخل الخلايا. بعد ذلك، ضع الماصة في حامل الماصة في مرحلة الرأس.
ضع ضغطا إيجابيا لطيفا على الماصة من خلال حقنة سعة 5 ملليلتر عن طريق إزاحة المكبس حوالي 1 ملليلتر قبل إنزال الماصة في محلول الحمام. بعد ذلك ، اختر وضع V-clamp على مكبر الصوت ، وافتح واجهة اختبار الغشاء في البرنامج.
تحت المجهر ، حرك الماصة بالقرب من الخلية العصبية المستهدفة. بعد ذلك ، قم بالضغط الإيجابي من الماصة لاجتياز طبقة الخلايا الدبقية عبر القمر الصناعي حتى يتم ملاحظة تضخم مفاجئ في المساحة بين الخلايا العصبية والطبقة المحيطة بها من الخلايا الدبقية عبر الأقمار الصناعية. بعد ذلك ، استمر في تحريك الماصة نحو الخلايا العصبية حتى يتم ملاحظة غمازة على الخلايا العصبية.
في تحضيرنا ، تحيط الخلايا العصبية بخلايا دبقية الأقمار الصناعية. لذلك ، لاختراق طبقات الخلايا الدبقية والوصول إلى الخلايا العصبية الفردية ، يتم الحفاظ على ماصة التسجيل عند ضغط إيجابي مرتفع.
بعد ذلك ، قلل الضغط الإيجابي. احصل على ختم جيجا أوم مع شفط لطيف.
للحصول على تكوين تسجيل الخلية الكاملة ، اخترق غشاء الخلية العصبية عن طريق شفط قصير ولكن قوي.
بدلا من ذلك ، استخدم وظيفة الانطلاق على مكبر الصوت أثناء تطبيق الشفط.
بمجرد إنشاء وضع الخلية الكاملة ، قم بتعويض سعة الخلية بأكملها ومقاومة السلسلة عن طريق تدوير مقابض تعويض السعة والمقاومة على مكبر الصوت. ثم أغلق نافذة اختبار الغشاء. اختر الوضع العادي I-clamp عن طريق تدوير مقبض الوضع على مكبر الصوت.
بعد ذلك ، انقر فوق فتح البروتوكول في البرنامج. حدد وقم بتحميل البروتوكول لقياس قاعدة متغيرة ، وانقر فوق تسجيل لبدء التسجيل. لفحص استثارة الخلايا العصبية ، قم بقياس مقاومة الإدخال والقاعدة الريوية عن طريق حقن سلسلة متدرجة من تيارات إزالة الاستقطاب في خطوات من 100 بيكوأمبير.