موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:41 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بجهاز موائع دقيقة مجزأ مطلي بطبقة رقيقة موضوعة فوق مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية منقوشة أو MEA.
يحمل الجهاز الخلايا العصبية القشرية المشتقة من iPSC المزروعة الملتصقة بأقطاب كهربائية دقيقة في MEA.
تتواصل هذه الخلايا العصبية عبر الإشارات الكهربائية. سجل هذه الإشارات كنشاط عصبي أساسي.
بعد ذلك ، قم بزرع الجهاز بخلايا الورم الدبقي عالية الجودة الغنية بالغلوتامات للأطفال ، وهي نوع من خلايا ورم المخ ، واحتضنها.
بمرور الوقت ، تدخل خلايا الورم الدبقي إلى القناة وترتبط ، مما يؤسس الثقافة المشتركة. في وقت لاحق ، تطلق خلايا الورم الدبقي الغلوتامات ، وهو ناقل عصبي مثير.
تتفاعل الغلوتامات المنبعثة مع المستقبلات العصبية ، مما يؤدي إلى تدفق أيونات الكالسيوم والصوديوم التي تسبب إزالة استقطاب الغشاء العصبي.
هذا يحفز استثارة الخلايا العصبية ويعزز النشاط العصبي.
إعادة تسجيل الإشارات الكهربائية ، وتشير الزيادة الكبيرة بعد الزراعة المشتركة إلى تفاعل الخلايا العصبية والورم الدبقي الناجح.
قم بزرع خلايا UW479 و BT35 المدرجة بالتربسين فوق الخلايا العصبية الجلوتاميتية الناضجة الملتصقة في كل جهاز مخصص للسوائل الدقيقة. حافظ على المزارع المشتركة لمدة يومين في بيئة خاضعة للرقابة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع الخلايا العصبية الجلوتاماتيرجية D11 والوسط اللاحق.
عد خلايا الورم الدبقي عالية الدرجة لدى الأطفال باستخدام الصور المجهرية التي تم تحليلها باستخدام برنامج تحليل الصور لتقييم قابليتها للحياة وحساب النسبة المئوية للخلايا. ضع MFD في جهاز التسجيل ، واستخدم برنامجا متاحا تجاريا لإجراء التسجيل الفيزيولوجي الكهربي للخلايا العصبية الجلوتاماتية في اليوم الحادي والعشرين.
قبل بذر خلايا الورم الدبقي عالية الدرجة لدى الأطفال ، قم بإجراء تسجيل فيزيولوجي كهربي ثان للخلايا العصبية الجلوتاماتيرجية المتمايزة المزروعة كعنصر تحكم ، بالتوازي مع الثقافة المشتركة.