تقييم آثار السموم على تطور الشبكة العصبية لجنين الكتاكيت باستخدام مصفوفات متعددة الأقطاب الكهربائية

ابدأ بالثقافات الملتصقة للخلايا العصبية الجنينية المبكرة على مصفوفات متعددة الأقطاب الكهربائية المطلية بالمصفوفة خارج الخلية ، أو MEAs.

قاعدة MEAs على شبكات من الأقطاب الكهربائية الصغيرة التي تسجل نشاط الخلايا العصبية.

في ثقافة الاختبار ، تنمو الخلايا العصبية في وجود مادة سامة ، بينما في ثقافة التحكم ، تنمو الخلايا العصبية بدون السم.

قبل التسجيل ، استبدل الوسائط في كلا المنطقتين المتوسطيتين المتوسطتين بوسائط خالية من السموم واحتضانها لفترة وجيزة.

بعد ذلك ، ضع MEA واحدا في جهاز التسجيل وابدأ التسجيل.

تتواصل الخلايا العصبية عبر نبضات كهربائية تسمى إمكانات الفعل أو الارتفاعات.

في المشبك ، تؤدي إمكانات الفعل هذه إلى إطلاق الناقل العصبي ، مما يؤدي إلى نشر الإشارة إلى الخلية العصبية التالية.

تسجل أقطاب MEA المسامير الناتجة عن الخلايا العصبية المتصلة متشابكيا.

في حالة التحكم ، تظهر الشبكة العصبية الناضجة السليمة نشاطا متزامنا للارتفاع.

في ثقافة الاختبار ، يشير انخفاض الارتفاع والتزامن إلى ضعف نضوج الشبكة العصبية الناجم عن السم.

في يوم الاستحواذ ، استبدل وسط الثقافة بوسط عصبي قاعدي جديد ، وأعد المصفوفات إلى حاضنة ثاني أكسيد الكربون₂ لمدة ساعتين على الأقل قبل التسجيل. ابدأ تشغيل برنامج التسجيل واضبط درجة حرارة المصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية على 37 درجة مئوية من خلال النقر على أيقونة درجة الحرارة. قم بتعيين معلمات الاستحواذ عن طريق تحديد التدفقات في لوحة النافذة اليسرى ، والنقر بزر الماوس الأيمن على أيقونة الملهمة. ثم حدد إضافة معالجة وكاشف سبايك وانقر فوق موافق في النافذة المنبثقة. سيظهر Spike Detector 6 by STD أسفل اسم الملف.

بعد ذلك ، انقر بزر الماوس الأيمن فوق Spike Detector ، وحدد Add Processing and Burst Detector ، وانقر فوق "موافق" في النافذة المنبثقة. سيظهر كاشف الاندفاع ISI أسفل أيقونة الملهمة. ثم انقر بزر الماوس الأيمن فوق Burst Detector ، وحدد إضافة مترجم المعالجة والإحصائيات العصبية. في النافذة المنبثقة، تأكد من تحديد رأس الملف وإحصائيات البئر المجمعة والمزامنة. انقر فوق موافق.

سيظهر مترجم الإحصائيات أدناه. انقر فوق أيقونة الساعة في أسفل الشاشة وقم بتغيير المعلومات في قسم الإعدادات للتسجيل كل 5.1 دقيقة والتسجيل لمدة خمس دقائق. سيبدأ هذا على الفور وسيتم تنفيذه مرة واحدة. بعد استرداد المصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية من الحاضنة ، ضعها على وحدة التسجيل وثبتها في مكانها. ابدأ في تسجيل نشاط الشبكة بالنقر فوق بدء التسجيل في قسم التسجيل المجدول.