التلوين المناعي الفلوري للخلايا العصبية في الحصين داخل رقاقة ميكروفلويديك

خذ شريحة ميكروفلويديك تحتوي على الخلايا العصبية الحصين للفئران.

تتميز الشريحة بخزانات جسدية ومحورية ، مع مقصورات مقسمة بواسطة أخاديد صغيرة ، مما يؤدي إلى تقسيم الخلايا العصبية بشكل فعال وعزل المناطق الجسدية والمحورية.

قم بإزالة الوسائط وإضافة الفورمالديهايد. احتضان لإصلاح الخلايا العصبية والحفاظ على بنيتها.

قم بإزالة الفورمالديهايد الزائد واغسله بمحلول عازل. ثم أضف منظفا لاختراق الخلايا العصبية.

استبدل المنظف بمحلول مانع لمنع مواقع الربط غير المحددة.

قم بإزالة محلول المنع واحتضانه بالأجسام المضادة الأولية التي ترتبط بعلامات عصبية مشبكية محددة ، وهي بروتينات غشائية متكاملة على الحويصلات المتشابكة.

قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة واغسلها بمحلول عازل.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف العلامات المتشابكة.

قم بإزالة الأجسام المضادة الثانوية غير المرتبطة وغسلها بمحلول عازل.

تحت المجهر متحد البؤر ، قم بتصوير الشريحة لتصور العلامات المشبكية العصبية الفلورية.

لبدء التلوين المناعي الفلوري ، قم بإزالة معظم الوسائط من الشريحة ، مع الحفاظ على رطوبة المقصورات الداخلية. على الفور ، أضف 100 ميكرولتر من محلول التثبيت إلى الآبار العلوية للمقصورات المحورية والجسدية.

بعد دقيقة واحدة ، أضف 100 ميكرولتر من محلول التثبيت إلى الآبا