موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:26 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بمحلول يحتوي على صبغة فلورية خضراء مرتبطة بسلسلة ديكستران كبيرة. ثم أضف محلول صبغة حمراء مرتبطة بسلسلة ديكستران صغيرة.
امزج الأصباغ جيدا وأخذها في حقنة.
حقن خليط الصبغة هذا عن طريق الوريد في فأر مخدر من خلال الجيب الرجعي الحجاجي ، وهو وريد خلف العين.
يعاني هذا الفأر من التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي أو EAE.
في هذه الحالة, ينزعج الحاجز الدموي الدماغي مع ضعف التقاطعات الضيقة بين الخلايا البطانية في الأوعية الدموية في الدماغ مع وجود فجوات.
اسمح للفأر بالاستيقاظ تماما واستعادة الحركة ، مما يمكن الأصباغ من الدوران.
تنتشر الصبغة الحمراء ذات سلسلة ديكستران الصغيرة بسهولة من خلال الفجوات الصغيرة في أنسجة المخ ، بينما تنتشر الصبغة الخضراء المرتبطة بسلسلة ديكستران الكبيرة إذا كان الضرر شديدا.
ترتبط كمية كل صبغة فلورية في أنسجة المخ بمدى اضطراب الحاجز الدموي الدماغي.
لتحضير محاليل مخزون ديكستران ، قم بإذابة 10 ملليغرام من ثلاثة كيلودالتون ديكستران تكساس ريد في 500 ميكرولتر من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ ، و 5 ملليغرام من 10 كيلودالتون ديكستران أليكسا فلور 488 في 250 ميكرولتر من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪.
بالنسبة لمحلول عمل ديكستران ، قبل الحقن مباشرة ، قم بإضافة 55 ميكرولترا من محلول مخزون 10 كيلو دالتون ديكستران أليكسا فلور 488 على قطعة من فيلم مانع التسرب ، ثم أضف 55 ميكرولترا من محلول مخزون ديكستران تكساس الأحمر بثلاثة كيلودالتون. امزج واجمع 100 ميكرولتر في حقنة دقيقة يمكن التخلص منها.
بعد ذلك ، ضع فأرة مخدرة في وضع جانبي على الطاولة. حقن 100 ميكرولتر من أدوات تتبع الفلورسنت في الماوس قبل أن يستيقظ الفأر. دع جهاز التتبع يدور لمدة 15 دقيقة.