توليد العضيات العصبية الدوبامينية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

خذ الخلايا الجذعية الجنينية البشرية ، أو hESCs ، في قارورة مغلفة بمصفوفة خارج الخلية.

استبدل الوسط بوسط تحريض عصبي واحتضان الخلايا الجذعية الكينية العصبية وتمييزها إلى خلية سلفية عصبية ، أو مستعمرات NPC.

أضف محلول إنزيمي لفصل المستعمرات.

جهاز الطرد المركزي ، وإزالة المادة الطافية ، وإعادة تعليق الخلايا في وسط الحث مع عوامل النمو لدعم تمايز NPC.

أضف تعليق الخلية إلى آبار صغيرة معكوسة على شكل هرمي لتشكيل مجالات عصبية ثلاثية الأبعاد.

انقل المجالات العصبية إلى صفيحة مغلفة بمصفوفة خارج الخلية تحتوي على وسط تمايز مع عوامل النمو والجزيئات الصغيرة. احتضان تحت التحريض لتعزيز التمايز إلى الخلايا العصبية السلفية الدوبامينية.

استبدل الوسط بوسط النضج العصبي وضع المجالات العصبية على قرص غشائي في ملحق بئر ثقافة ، مما يسمح بانتشار الهواء والمواد المغذية.

احتضان في ظل ظروف ثابتة لتشكيل عضيات ثلاثية الأبعاد تتكون من خلايا عصبية دوبامين ناضجة.

هذه العضيات ، التي تحاكي الدماغ النامي ، مفيدة لدراسة تنكس الخلايا العصبية الدوبامين ، وهي سمة من سمات مرض باركنسون.

استبدل وسط الخلايا الجذعية المستخدم للحفاظ على ميزات تعدد القدرات في hESCs ، بوسط خال من المصل يحتوي على كوكتيل تثبيط SMAD مزدوج لبدء الحث العصبي ، و 10 مثبطات ميكرومولار ROCK لزيادة معدل بقاء الخلايا أثناء المرور في اليوم التالي. في اليوم الأول