JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:48 د • April 28th, 2025
خذ شريحة متعددة الغرف مع أغطية مغلفة بالبروتين تحتوي على خلايا عصبية مشتقة من الدم المحيطي ثابت ومنفذ ، بما في ذلك الخلايا السلفية العصبية والخلايا النجمية والخلايا العصبية.
أضف حلا للحظر لحظر مواقع الربط غير المحددة.
احتضان بالأجسام المضادة المترافقة بالصبغة الفلورية التي ترتبط ببروتينات خلوية معينة، مما يتيح تحديد أنواع الخلايا العصبية.
اغسل بمخزن مؤقت لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضن بصبغة نووية فلورية لتلطيخ النوى.
انقل قسيمة الغطاء إلى شريحة مع وسائط تثبيت. ثم ضع الشريحة المحضرة تحت مجهر مضان مزود بمرشحات مناسبة.
باستخدام أطوال موجية محددة من الضوء ، قم بإثارة الأصباغ الفلورية ، مما يجعلها تنبعث منها الضوء بأطوال موجية أطول.
تتوافق إشارات الفلورسنت المنبعثة مع البروتينات الخلوية المسماة ، مما يسلط الضوء بوضوح على أنواع الخلايا العصبية المختلفة ويؤكد تمايز خلايا الدم المعاد برمجتها.
أضف حل حظر PBS و 5٪ BSA. سد الخلايا في درجة حرارة الغرفة على لوحة هزاز لمدة ساعة واحدة. قم بإعداد تخفيف مناسب للأجسام المضادة في 1٪ BSA PBS واحتضان الخلايا بالأجسام المضادة على صفيحة هزاز لمدة 1.5 ساعة في درجة حرارة الغرفة. اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام PBS لمدة خمس دقائق لكل غسلة. احتضان الخلايا باستخدام DAPI وقم بتركيب الغطاء بوسائط التثبيت للتصور في المجهر.