موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:09 دقيقة • April 28th, 2025
ضع شريحة الحصين من دماغ الفأر في بئر يحتوي على مخزن مؤقت. تحتوي الشريحة على شبكة من الخلايا العصبية التي تتواصل من خلال نقاط الاشتباك العصبي.
تحتوي أطراف الخلايا العصبية قبل المشبكية على حويصلات مملوءة بالناقلات العصبية ذات ناقلات الغشاء المميزة ، بينما تتميز أطراف ما بعد المشبكي ببروتينات سقالة مميزة تنظم مستقبلات الناقل العصبي. كلاهما بمثابة علامات رئيسية للهياكل المتشابكة.
استبدل المخزن المؤقت بمحلول مانع للنفاذية واحتضانه بالتحريض لاختراق الأغشية الخلوية ومنع مواقع الربط غير المحددة.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف علامات ما قبل المشبكي وما بعد المشبكي واحتضانها بالتحريض للسماح بالارتباط.
اغسل الشريحة، وأضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور الخاصة بالأجسام المضادة الأولية، واحتضن بالتحريض في الظلام.
اغسل الشريحة ثم قم بتثبيتها على شريحة.
باستخدام مجهر متحد البؤر ، حدد منطقة الاهتمام وقم بتكبيرها لتصور نقاط الاشتباك العصبي.
التقط الصور لتحديد علامات ما قبل المشبكي وما بعد المشبكي المصنفة بالفلورسنت وتقييم توسيطها المشترك في نقاط الاشتباك العصبي.
لبدء تلطيخ التألق المناعي ، استبدل PBS في آبار الشرائح بمخزن مؤقت مانع ونفاذة ، واحتضانه في درجة حرارة الغرفة لمدة 4 إلى 6 ساعات على شاكر. قرب نهاية خطوة الحجب ، قم بتخفيف الجسم المضاد إلى VGLUT1 1 إلى 2000 في المخزن المؤق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية