التصوير متحد البؤر لحركة الميتوكوندريا داخل الخلايا قليلة التغصن في مزارع شرائح الدماغ العضوية
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:11 دقيقة • April 28th, 2025
ابدأ بإعداد غرفة حمام مجهر متحد البؤر مع محلول تصوير دائري ودرجة حرارة مضبوطة.
خذ غشاء بوليمري محب للماء يحتوي على شريحة دماغ فأر عضوية تم فيها تحويل الخلايا قليلة التغصن للتعبير عن بروتين فلورسنت أحمر خاص بالميتوكوندريا وبروتين فلوري أخضر خاص بالعزلة الخلوية.
يسمح التألق المزدوج بتصور واضح لديناميكيات الميتوكوندريا داخل العصارة الخلوية للخلايا قليلة التغصن.
اغمر الشريحة في وسط الحمام وثبتها بمرساة القيثارة.
اخفض الهدف وحدد خلية قليلة التغصن صحية للمسح.
ضبط طاقة الليزر لتقليل سمية الخلية والتبييض الضوئي.
قم بتعيين معلمات المجهر ثم قم بتسجيل صور الفاصل الزمني للميتوكوندريا المصنفة بالفلورسنت.
التقط صورا z-stack على أعماق مختلفة للحصول على عرض ثلاثي الأبعاد عالي الدقة للخلية بأكملها.
قم بمعالجة الصور لتصور حركة الميتوكوندريا داخل الخلايا قليلة التغصن.
استخدم الملقط لنقل قصاصات الورق مع الشريحة من طبق بتري إلى الجزء العلوي من الحمام. ثم ضع طرفي الملقط على كل جانب من قصاصات الورق بحيث يلمسان قصاصات الورق دون لمس الشريحة. وادفع قصاصات الورق من خلال المحلول إلى قاع الحمام. ضع قصاصات الورق في منتصف الحمام.
استخدم الملقط لوضع المرساة أو القيثارة أعلى قصاصات الورق دون لمس الشريحة. ثم أعد تشغيل المضخة التمعجية. اخفض الهدف إلى العينة. ثم استخدم العدسات ومصباح الفلورسنت للعثور بسرعة على خلية قليلة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية