تصوير تنشيط الخلايا العصبية في الحصين في أقسام دماغ الفئران

ابدأ بأقسام دماغ الفأر التي تعرض الحصين الظهري، الغني بالخلايا العصبية.

أضف بيروكسيد الهيدروجين لإخماد نشاط البيروكسيديز العصبي، متبوعا بالغسيل.

تعامل مع مخزن مؤقت للنفاذية، ثم قم بتطبيق مخزن مؤقت للحظر لمنع الربط غير المحدد.

أضف الأجسام المضادة الأولية واحتضن بالتحريض. ترتبط هذه الأجسام المضادة ببروتينات علامة تنشيط الخلايا العصبية.

اغسل واستخدم الأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالبيوتين لربط الأجسام المضادة الأولية. <

p style='margin-left:36pt;text-align:justify;'>اشطف وأدخل مركب أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز الذي يرتبط بالبيوتين على المترافقات.

اغسل مرة أخرى، ثم أضف ركيزة كروموجينيكية، والتي تتأكسد بواسطة البيروكسيداز لتوليد راسب بني. أوقف التفاعل مع PBS.

انقل الأقسام إلى شريحة مغلفة بالجيلاتين وقم بتجفيفها باستخدام تركيزات متزايدة من الإيثانول. ثم امسح الأقسام في الزيلين وقم بتركيبها.

ضع الشريحة تحت مجهر المجال الساطع.

تحت الإضاءة الخفيفة، تنقل المناطق غير الملطخة الضوء وتظهر ساطعة، بينما تمتص الخلايا العصبية الملطخة الضوء وتعكس الضوء وتبدو أغمق.

تشير المنطقة الداكنة المميزة إلى تنشيط الخلايا العصبية داخل الحصين.

انقل ثلاثة إلى خمسة أقسام من الحصين الظهري لكل فأر إلى آبار صفيحة متعددة البئر 24 تحتوي على 500 ميكرولتر من 0.1 مولار PBS لكل بئر. اغسل الأقسام الموجودة في كل بئر ب 500 ميكرولتر