موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:40 دقيقة • April 28th, 2025
تأمين شريحة حصين الفأر العضوي في غرفة تجريبية.
تحتوي الشريحة على خلايا عصبية وخلايا نجمية منقولة تعبر عن مستشعر ATP مع بروتينات الفلورسنت المانحة والمتقبلة.
ضع الغرفة على مرحلة المجهر الفلوري وقم بتثبيتها باستخدام ACSF المؤكسج.
السماح للشريحة بالتكيف مع الظروف المخزنة مؤقتا.
باستخدام ضوء الإرسال ، ركز الشريحة وحدد مجال الاهتمام.
قم بالتبديل إلى وضع التألق وإثارة البروتين الفلوري المتبرع لبدء الانبعاث الفلوري.
عند ربط ATP، يخضع المستشعر لتغييرات توافقية، مما يتيح نقل الطاقة المستندة إلى التألق من المانح إلى المتقبل، الذي ينبعث منه التألق بطول موجي أطول.
استخدم مرآة ثنائية اللون ومرشحات ممر النطاق لعزل وفصل انبعاثات المانحين والمتقبلين.
حدد منطقة بدون مضان لطرح الخلفية. بعد ذلك ، حدد الخلايا المستهدفة وسجل تألقها بمرور الوقت.
احسب نسبة FRET لمراقبة مستويات ATP داخل الخلايا في الوقت الفعلي.
قم بإعداد ACSF التجريبي واحصل على درجة حموضة 7.4 عن طريق فقاعاته بنسبة 95٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون من خلال أنبوب مدخل متصل بإمداد الكربوجين لمدة 30 دقيقة على الأقل. حافظ على المحلول الملحي في فقاعات خلال التجربة بأكملها. ثم قم بتشغيل مصدر ضوء الفلورسنت في أحادي اللون.
انقل ثقافة الشرائح العضوية إلى الغرفة التجريبية. ضع شبكة فوق ثقافة الشريحة العضوية مع الإطار لأسفل ، دون لمس الثقافة ، والخيوط لأعلى
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية