تصوير الفوتون في الجسم الحي لشبكية العين الفأر

خذ فأرا معدلا وراثيا مخدرا مع تثبيت رأسه بزاوية على حامل للتصوير في الجسم الحي لشبكية الفأر.

تحتوي شبكية العين على خلايا عقدية شبكية العينية، أو RGCs، تعبر عن بروتين يحمل علامة بالفلوروفور.

ضع زيوت تشحيم العين وقم بتركيب غطاء على العين.

تحت المجهر ، قم بإضاءة شبكية العين بشكل موحد لإثارة البروتينات الفلورية في RGCs.

باستخدام التألق المنبعث ، احصل على عرض واسع النطاق للمستوى البؤري RGCs و RGCs خارج نطاق التركيز.

قم بالتبديل إلى وضع التصوير ثنائي الفوتون، مع التركيز على ضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة منخفض الطاقة في طبقة RGC.

عند النقطة المحورية ، تثير الطاقة المجمعة من فوتونين الفلوروفور ، والذي يطلق الطاقة بعد ذلك على شكل تألق.

نظرا لأن الإثارة تقتصر على نقطة واحدة، يتم تقليل التألق من المستويات البؤرية الأخرى.

التقط صورا على مستويات بؤرية متعددة على طول المحور z لتصوير طبقة RGC بأكملها.

ضع قطرات العين المزلقة على كلتا عيني الفأر. قم بتدوير الذراع الرئيسي لحامل الرأس حتى يتم توجيه تلميذ العين بما يتماشى مع مسار الضوء ، وضع غطاء رقم 1.5 في حامل الفلتر المضغوط. بعد تثبيت الحامل في مرحلة المجهر ، قم بخفض الغطاء حتى يلامس زيت التشحيم i-gel دون لمس القرنية. واضبط المرحلة في البعد xy وموضع z الهدف حتى يغطي ضوء الإثارة العريض القرنية بالكامل.

استخدم العدسة لمواصلة ضبط موضع z ، حتى يتم التركيز ع