التصوير الفلوري لديناميكيات المناعة العصبية باستخدام غرسة الجمجمة

ابدأ بفأر مخدر معدل وراثيا مع نافذة تصوير زجاجية دائرية ولوحة رأس مزروعة على جمجمته.

يتم تصنيف الخلايا الدبقية الصغيرة أو المناعية والخلايا العصبية ببروتينات الفلورسنت.

بعد ذلك، قم بتأمين الماوس على مرحلة المجهر ثنائي الفوتون.

ثم، قم بحقن صبغة فلورية داخل الصفاق لتلطيخ الأوعية الدموية باللون الأحمر.

نظف نافذة التصوير الزجاجية، وقم بتطبيق قطرة ملحية، وخفض هدف المجهر.

بعد ذلك، اضبط ضوء الليزر لالتقاط صورة للأوعية الدموية. سجل نمط التفرع والإحداثيات لتحديد موقع نفس المنطقة وتصويرها لاحقا.

الآن ، اضبط الليزر لإثارة البروتينات الفلورية ، مما يتسبب في تألق الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا العصبية.

باستخدام نمط التفرع المسجل ، حدد نفس المنطقة والتقط صورا للخلايا بانتظام.

تظل شبكة الأوعية الدموية والخلايا العصبية مستقرة ، بينما تعكس تغيرات موضع الخلايا الدبقية الصغيرة بمرور الوقت ديناميكيات المناعة استجابة لنشاط الخلايا العصبية.

حفر فتحة دائرية حوالي 4 ملليمترات في الجمجمة باستخدام مثقاب الأسنان. أثناء الحفر ، قم بترطيب الجمجمة بانتظام بمحلول ملحي معقم ومسحات قطنية لتبريد الدماغ. إزالة بقايا العظام وتنعيم عظم الجمجمة.

عند الانتهاء ، قم بإزالة هذا الجزء من الجمجمة بعناية باستخدام ملقط مدبب. بعد إزالة الجمجمة ، ضع بعناية غطاء زجاج صغير مبلل بالمحلول الملحي في حج القحف. جفف المحلول الملحي الزائد باستخدام منديل معقم. باستخدام قضيب مدبب ، ضع غراء سيانواكريليت حول النافذة واتركه يلتصق بالدماغ والجمجمة.

ضع الغراء التمهيدي على بقية الجمجمة وقم بمعالجته بضوء معالجة لمدة 20 إلى 40 ثانية. قم بإنشاء بئر حول النافذة باستخدام الغراء النهائي ومعالجته بضوء معالجة لمدة 20 إلى 40 ثانية. قم بلصق لوحة رأس صغيرة على الجمجمة في نصف الكرة الأرضية المقابل لحج القحف باستخدام الغراء التمهيدي ، ثم باستخدام الغراء النهائي ، قم بمعالجة كليهما لمدة 20 إلى 40 ثانية.

بعد استيقاظ الفأر ، قم بحقن جرعة واحدة تحت الجلد من البوبرينورفين SR كمسكن بعد الجراحة ، والتي ستكون كافية لمدة 72 ساعة. زود الفأر بطعام طري إضافي لتسهيل الشفاء الصحي. يمكن إجراء التصوير في وقت مبكر يصل إلى أسبوعين بعد جراحة الزرع. استخدم البراغي لتركيب لوحة الرأس على مرحلة المجهر الفوتوني ، والتي يجب الحفاظ عليها عند 35 درجة مئوية باستخدام لوحة تسخين.

حقن الفأر تحت الجلد ب 100 ميكرولتر من صبغة الأوعية الدموية ، مثل Rhodamine B. نظف سطح نافذة الجمجمة برفق باستخدام قطعة قطن مغموسة بنسبة 70٪ من الإيثانول. ضع بضع قطرات من الماء أو المحلول الملحي على النافذة وقم بخفض العدسة الموضوعية في المحلول. تأكد من إيقاف تشغيل الليزر أثناء انخفاض الهدف.

ارسم خريطة مسار يدويا للإشارة إلى معالم الأوعية الدموية الرئيسية ، أثناء النظر من خلال العدسة. استخدم هذا الرسم لتحديد المناطق المحددة أثناء تصوير الفوتونين. اجمع صورا للخلايا والأوعية الفلورية باستخدام تصوير الفوتونين. انظر المخطوطة النصية للحصول على معلمات التصوير. قم بتدوين ملاحظات دقيقة مع الإحداثيات المناسبة لضمان إمكانية إعادة النظر في المناطق الدقيقة للتصوير اللاحق.

اجمع العديد من مجالات الرؤية في جلسة التصوير الأولية هذه.