موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:04 دقيقة • May 29th, 2025
ابدئي بشرائح أنسجة المخ الثابتة مسبقا التي تم جمعها من مراحل الفئران المبكرة والمتأخرة بعد الولادة.
تحتوي الشريحة على خلايا عصبية حبيبية مخيخية ، أو CGNs ، تعبر عن بروتين الفلورسنت.
باستخدام المجهر متحد البؤر ، ركز على CGN فلوري واحد.
التقط صورا z-stack على أعماق متفاوتة لإنشاء عرض ثلاثي الأبعاد للخلايا العصبية.
باستخدام برنامج التصوير ، تتبع الخلايا العصبية أو الإسقاطات الطويلة ، بما في ذلك التشعبات والمحاور.
قياس طول التغصنات من جسم الخلية إلى طرفها.
تحليل تكوين المخلب الشجيري ، والهياكل المتخصصة في أطراف التغصنات حيث يتم تلقي إشارات من الخلايا العصبية الأخرى.
أيضا ، قم بتقييم مساحة سطح الخلايا العصبية وحجمها.
في مرحلة ما بعد الولادة المبكرة ، تظهر الخلايا العصبية عددا متزايدا من التشعبات ، مع عدم تكوين مخلب.
وفي الوقت نفسه ، في مرحلة ما بعد الولادة المتأخرة ، يوجد عدد أقل من التشعبات ، لكن أطوالها وعدد المخالب يزداد.
وهكذا ، مع تقدم العمر ، تخضع CGNs لتكوين التشابك الشبكي وتشكل اتصالات مع خلايا أخرى لنقل الإشارات.
لدراسة مورفولوجيا CGNs المفردة المثقبة بالكهرباء من أقسام الدماغ السهمية للجرو التجريبي ، التقط صورا مكدس z بمعدل 0.5 ميكرومتر لكل كومة على مجهر متحد البؤر. صورة خلية واحدة لكل نافذة صورة للسماح بتحليل الصور بسهولة وإعادة البناء ثلاثية الأبعاد. تحليل طول العصبات وتشكيل المخلب الشجيري بطريقة أعمى باستخدام متتبع العصبي البسيط.
قم بتحميل صور مكدس أحادية القناة ل CGNs المثقوبة بالكهرباء في فيجي ، وانقر فوق الإضافات والتجزئة وتتبع العصبة البسيطة. حدد إنشاء عارض ثلاثي الأبعاد جديد من القائمة المنسدلة. قم بالتمرير إلى قاعدة التغصنات المتصلة بسوما الخلية ، وابدأ الاستحمام بالنقر فوق التقاطع. تتبع المسار يدويا بالنقر فوق الأقسام التي تكون فيها إشارة تعبئة الخلية أكثر سطوعا ، والضغط على Y للاحتفاظ بالتتبع.
تتبع حتى نهاية التغصنات وقم بتأكيد المسار بالضغط على F. بدلا من ذلك ، تتبع حتى قاعدة المخلب. بعد ذلك ، تتبع المخلب من قاعدة الهيكل حتى نهاية أطول عصب. تتبع الفروع الثانوية والثالثية عن طريق الضغط باستمرار على Control على Windows ، أو Alt على نظام التشغيل Mac OS والنقر فوق المسار. قم بتأكيد المسار بالضغط على F. لاحظ أن قياسات الآثار مرئية في نافذة منفصلة. اجمع جميع أحجام فروع المخلب للحصول على الطول الإجمالي لكل مخلب.