القياس الكمي للخلايا العصبية المتولدة حديثا في أنسجة دماغ الفئران باستخدام تقنية التجزئة البصرية

خذ شرائح دماغ الحصين من فأر محقون ببرومودوكسيوريدين، أو BrdU، وهو نظير نيوكليوزيد للثايميدين.

يتكامل BrdU في الحمض النووي أثناء انقسام الخلية ، ويضع علامات على الخلايا العصبية المتولدة حديثا داخل التلفيف المسنن ، وهي منطقة لتكوين الخلايا العصبية.

احتضان بعامل مؤكسد لتعطيل إنزيمات البيروكسيديز الذاتية.

عالج بالحمض لتشويه الحمض النووي وفضح BrdU ، ثم قم بتحييد الحمض.

احتضان بمنظف لاختراق الأغشية الخلوية ومحلول مانع لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.

احتضان بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف BrdU ، متبوعة بالأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالبيروكسيداز الخاصة بالأجسام المضادة الأولية.

أدخل ركيزة كروموجينيك وعامل مؤكسد ، مما يسمح للبيروكسيداز بتحويل الركيزة إلى بقايا ملونة.

قم بتركيب الأنسجة وقم بصبغة ربط الحمض النووي.

جفف الأنسجة ثم عالجها لزيادة الشفافية.

تحت المجهر ، حدد التلفيف المسنن.

باستخدام تقنية التجزئة البصرية ، قم بتحليل مستويات متعددة عبر سمك الأنسجة لتحديد الخلايا العصبية المسماة BrdU.

عندما تكون جاهزا للبدء ، تلطيخ مناعي ، اسمح للأقسام بالصعود إلى درجة حرارة الغرفة. ثم استخدم فرشاة الرسم لنقل كل قسم خامس من سلسلة من أقسام الحصين إلى شبكات تلطيخ 25 بئرا موضوعة في أطباق بتري مليئة ب PBS. يجب أن يكون هناك 8 إلى 12 قسما لكل حصين للتلطيخ. انقل شبكات التلوين ، التي تحتوي على الأقسام ، إل