التصوير الطولي ثنائي الفوتون للخلايا العصبية المصنفة بالفلورسنت في الحصين الفأر الحي

خذ فأرا معدلا وراثيا مخدرا يعبر عن بروتينات الفلورسنت في الخلايا العصبية الهرمية المتناثرة.

يتم زرع الفأر بقنية تصوير فوق الحصين الظهري.

ضع الماوس تحت المجهر ثنائي الفوتون على وسادة تسخين ، وقم بتثبيت لوحة رأس القنية بالحامل لشل حركة رأسها.

ضع مرهما لمنع جفاف القرنية.

نظف القنية بالماء منزوع الأيونات وفحصها تحت هدف التكبير المنخفض للتحقق من وجود مشكلات في الحطام أو التلف أو التألق.

قم بمحاذاة قنية التصوير مع المحور البصري للمجهر للحصول على تصوير دقيق.

بعد ذلك ، قم بالتبديل إلى هدف عالي الدقة بالغمر في الماء.

املأ القنية بالماء منزوع الأيونات ، مع ضمان عدم وجود فقاعات هواء لتجنب تشويه الصورة.

قم بإجراء التصوير الطولي ثنائي الفوتون باستخدام ضوء الأشعة تحت الحمراء لإثارة الفلوروفورات بشكل انتقائي في المستوى البؤري ، مما يتيح تصوير الأنسجة العميقة.

تسهل القنية المزروعة الوصول المتكرر إلى الحصين الظهري لتتبع التغيرات التغصنية بمرور الوقت.

ضع الماوس تحت المجهر فوق سجادة التدفئة وقم بتثبيت لوحة الرأس بالحامل. ضع مرهم العين على عيون. ثم نظف قنية التصوير باستخدام حقنة وإبرة رفيعة لإسقاط الماء منزوع الأيونات في القنية ، متبوعا بإزالتها بمضخة تفريغ.

استخدم أهداف العمل الطويلة ذات التكبير المنخفض للتحقق بصريا من القنية بحثا عن المياه المتبقية والأوساخ والسلامة ووجود التألق. ثم قم بمحاذاة القنية مع المحور البصري عن طريق ضبط زوايا أذرع حامل الرأس.

قم بالتبديل إلى هدف 25x بفتحة عددية 1.0 ومسافة عمل 4 ملليمترات. ثم أضف كمية كافية من الماء منزوع الأيونات إلى القنية لملئها والحفاظ على الماء الزائد فوق القنية. أخيرا ، استخدم إثارة الفوتون وقم بتصوير إشارات الفلورسنت.