مراقبة استعادة الخلايا الروضة بين الأعصاب بالليزر في أسماك الزرد باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

ابدأ بيرقة الزرد التي تحتوي على خلايا بين الخلايا العصبية أو INMCs ، مثبتة على غطاء وتوضع تحت مجهر متحد البؤر.

INMCs هي خلايا سلفية ذات قدرة على التجدد تعرضت سابقا للاستئصال بالليزر.

أولا ، راقب المنطقة المتضررة في وضع التألق. يؤكد غياب التألق نجاح الاستئصال بالليزر.

بعد ذلك ، استخدم وضع التصوير بالضوء المنقول لفحص المنطقة المتضررة حيث تظهر الخلية حبيبية ومنتفخة مع نوى غير منتظمة ، مما يؤكد موت الخلايا.

يشير تجنيد البلاعم في الموقع إلى استجابة خلوية نشطة للإصابة.

الآن ، عد إلى وضع التألق والتقط صور الفاصل الزمني على فترات منتظمة لمراقبة الاسترداد.

أثناء مرحلة الاسترداد ، تقوم INMCs بتوسيع الإسقاطات إلى الفجوة ، مما يسهل الإغلاق وتعزيز الإصلاح الخلوي.

احفظ صور السلاسل الزمنية هذه للتحليل. يؤكد ظهور التألق المميز في المنطقة المستعصية النجاح في الشفاء.

لتصوير أجسام الخلايا بعد الاستئصال، ضمن قائمة القنوات، قم بإلغاء النقر فوق مسار DAPI لتعطيل ليزر الاستئصال، وافتح قائمة وضع الاستحواذ. انقر فوق تكبير/تصغير وقم بتقليل التكبير/التصغير إلى 0.7.

لتقييم نجاح استئصال الخلايا ، قم بمسح مجال الرؤية بسرعة. باستخدام نفس الإعدادات الخاصة بالتصوير المسبق ، التقط صورة ما بعد الاستئصال وحفظها. افحص صورة قناة أنبوب المضاعف الضوئي للضوء المرسل لتأكيد الضرر الخلوي بشكل أكبر. ستظهر الخلايا التالفة مظهرا حبيبيا ، وسوف تنتفخ النوى بشكل متكرر أو تظهر غير منتظمة في الشكل.

لتقييم استعادة جسم الخلية بعد الاستئصال ، قم بتنشيط كل من موضع المرحلة وخياري الوقت لالتقاط صورة الفاصل الزمني ، واضبط معلمات الوقت على النقطة الزمنية التجريبية المناسبة وفترات 15 دقيقة. ثم ابدأ التجربة للحصول على الصور ، واحفظ الملف الناتج عند اكتماله.